Магазин Toy&Toy — Super Toys

Обратите внимание

Средняя оценка: 4, мнений:

Средняя оценка: 4. 5, мнений:

Средняя оценка: 3.5, мнений:

Средняя оценка: 4, мнений:

Расскажите друзьям

Выскажите своё мнение

Масло Fleur Alpine оливковое детское 250 мл с 6 месяцев

Детское оливковое масло Fleur Alpine Extra Virgin для детей старше 6 месяцев оценит не только малыш, но и взрослые члены семьи:

• Стеклянная бутылочка 250 мл – удобный объем для использования всей семьей
• Подходит для малышей по вкусу и запаху благодаря смешиванию масел из нескольких сортов олив по специальному рецепту
• Масло упаковано в квадратную бутылочку Maraska из темного стекла необычной элегантной формы, которая сохраняет полезные свойства масла на протяжении всего срока годности
• Органический продукт, произведен и сертифицирован в соответствии с Регламентами Европейского Союза № 834/2007 и № 889/2008 об органическом сельском хозяйстве
• Произведено в Италии

ВАЖНАЯ ИНФОРМАЦИЯ: перед использованием масла в качестве продукта прикорма необходимо проконсультироваться с педиатром, который наблюдает малыша и знает все особенности его здоровья.

Детское оливковое масло Fleur Alpine добавляют в продукты прикорма — овощные пюре, супчики, пасту, салаты, начиная с 1-3 мл (1 капля), увеличивая к 12 месяцам до 5-6 мл (1 чайная ложка).

Вкус масла – мягкий с нотками свежескошенной травы и нежным оливковым ароматом. Легкая горчинка говорит о том, что масло свежее и сохранило все свои полезные свойства. Она исчезает при смешивании масла с продуктом (овощным пюре, пастой, супчиком, салатом). Если вы все же ощущаете горчинку от оливкового масла ­- попробуйте уменьшить количество масла буквально до одной капельки. В процессе дальнейшего использования масла вкусовые рецепторы адаптируются к новому продукту — вы начнете чувствовать его тонкий, изысканный вкус и наслаждаться им.

Оливковое масло Fleur Alpine получено механическим способом холодного прессования свежих оливок в течение 24 часов после сбора урожая, такой способ позволяет сохранить натуральность этих плодов и все полезные вещества в конечном продукте. Масло первого холодного отжима считается самым высококачественным.

Хранить в закрытом виде в сухом, прохладном, защищенном от света месте при температуре не выше +25°С. При температуре ниже +7 °С масло становится мутным, что не влияет на качество продукта. Для детского питания после вскрытия употребить в течение 30 дней.

Состав:

• Нерафинированное оливковое масло extra virgin первого холодного отжима*

*органическое сельское хозяйство соответствует законодательству ЕС (Регламенты ЕС №834/2007, №889/2008)

На 100 г продукта:

• Энергетическая ценность – 3389 кДж/ 824 ккал
• Жиры – 91,6 г
• в т.ч. насыщенные – 13 г
• мононенасыщенные – 69,6 г
• полиненасыщенные – 9 г

Возраст:

• С 6 месяцев и старше

Масса нетто:

Срок годности:

Масло Alpina Масло для террас (Alpina Oel fuer Terrassen) Светлый 750 мл / 0,75 кг

Подчеркните истинную ценность Вашей древесины! Alpina подарит мебели и деревянным поверхностям превосходное покрытие, которое будет выглядеть, как новое, долгое время. Практически безграничная палитра оттенков придаст каждому предмету индивидуальность и неповторимость. Пусть Alpina послужит Вам вдохновением – ведь теперь ничто не ограничивает полет Вашей фантазии! Мы выполним почти любой Ваш желаемый цветовой оттенок в установке компьютерной колеровки Alpina ColorMix. Он будет абсолютно индивидуальным и полностью соответствующим Вашему вкусу.

Идеальная защита деревянных полов
Вам нужно специальное масло для Вашей деревянной террасы или деревянного пола?

Практически без запаха и при работе с ним, и в период высыхания?

Сохраняющее естественную текстуру древесины?

Которое обеспечивает оптимальную защиту от влаги как внутри помещений, так и снаружи?

В Вашем любимом оттенка древесины?

Тогда Alpina ?l f?r Terrassen — Ваш правильный выбор.

Alpina ?l f?r Terrassen ухаживает за древесиной и отлично защищает её от влаги и загрязнений. Этот материал стоек к истиранию, он освежает цвета и при этом сохраняет уникальную текстуру деревянных террас, полов и других предметов интерьера.

Alpina ?l f?r Terrassen изготавливается на водной основе и поэтому может применяться без опасений для воздуха в помещениях, так как масло практически не имеет запаха как при его нанесении, так и при высыхании. Alpina ?l f?r Terrassen идеально для использования как для наружных так и для внутренних работ.

Свойства продукта
Для здорового микроклимата в помещении
Превосходно освежает цвет
Отличная защита от загрязнений и влаги
Сохраняет натуральную текстуру древесины
Область применения
Внутри и снаружи

Оттенок / степень глянца
Шелковисто-глянцевое

Размеры упаковки
0,75 л
2,5 л
Колеровка
Компьютерная колеровка в оттенки дерева. Необходимая УФ-защита обеспечивается только после компьютерной колеровки.

Нанесение
Тщательно удалить пыль, смолы и загрязнения соответствующим инструментом. Поверхноть обезжирить. Наносить масло только на сухое дерево, не имеющее лакового или эмалевого покрытия. Перед нанесением продукт тщательно перемешать. Наносить кистью до насыщения поверхности при температуре не ниже 8°С. Невпитавшееся масло удалить с помощью ветоши примерно через 15 минут. На торцевых сторонах и кромках наносить масло особенно интенсивно, при необходимости в 2 слоя. Очистить инструмент водой с мылом.

Высыхание
Второй слой наносить через 1-2 часа, поверхностный слой высыхает через 12 часов. В зависимости от толщины слоя и температуры поверхность полностью высыхает через 4-6 дней и может подвергаться полной нагрузке.

Расход
Примерно 65 мл/м2 на 1 слой

Подходящие инструменты
Для достижения оптимального результата используйте специально предназначенные для акриловых материалов кисти или валики. Инструменты промыть водой сразу после применения.

Полное описание и актуальные остатки в нашем интернет-магазине >>>

Mortierella alpina – обзор

23.3 Применение ARA-SCO и DHA-SCO для включения в детские смеси

Как описано в главе 5, в настоящее время производятся два основных SCO, богатые ARA и DHA. Первый производится с использованием гриба Mortierella alpina , а крупномасштабное производство (измеряется более 500 тонн масла в год) осуществляется компанией DSM Food Specialties BV (Нидерланды) на специально построенном ферментационном заводе в Италии. . Полученное масло продается исключительно Martek Biosciences Corp., Мэриленд, США. Сходные процессы выполняются в Японии компанией Suntory и в Китае компанией Wuhan Alking Engineering Co с использованием разных штаммов одного и того же организма.

Для производства масел, богатых ДГК, используются как минимум три различных процесса. Наиболее обильно производится масло из нефотосинтетического динофлагеллята, Crypthecodinium cohnii . Этим процессом управляет Martek BioSciences, и готовое масло смешивается в соотношении 1:2 с маслом арахидоновой кислоты для включения в детские смеси.В настоящее время эта смесь масел, продаваемая под торговой маркой Formulaid® (Martek Biosciences Corp, США), используется более чем в 60 странах, а общий объем продаж комбинированных масел превышает 1000 тонн в год с удвоением этого количества. прогнозируется на ближайшие 12 месяцев. Профиль жирных кислот этого масла (см. Таблицу 5.4) не показывает никаких других ненасыщенных жирных кислот, кроме олеиновой кислоты, поэтому масло уникально благодаря очень высокому содержанию ДГК и отсутствию всех других ПНЖК. В других процессах производства DHA используются организмы, известные как thraustochytrids, которые представляют собой нефотосинтезирующие морские организмы, первоначально считавшиеся морскими грибами.Однако эти масла не используются в приготовлении детских смесей. Один из этих процессов осуществляется в США компанией Martek Biosciences путем приобретения OmegaTech Inc. в 2002 году. В нем используется организм, известный как Schizochytrium sp. Второй процесс осуществляется в Германии компанией Nutrinova и использует родственный организм, называемый Ulkenia sp. Богатые ДГК масла Schizochytrium sp. и Ulkenia sp. также содержат докозапентаеновую кислоту (22:5n-6), которая, хотя и необычна, встречается у животных. Масла из обоих этих thraustochytrids находятся в стадии разработки для включения в различные продукты питания и напитки, чтобы обеспечить добавку DHA в рационе, и обсуждаются в следующем разделе.

По причинам, которые еще полностью не выяснены, синтез как ARA, так и DHA, по-видимому, не полностью развит у новорожденных и, возможно, вообще не развит у недоношенных детей. Некоторые исследователи (см. Krawczyk, 2001) считают, что младенцы могут сами синтезировать достаточное количество ARA и DHA при условии, что в рационе присутствуют предшественники LA и α-линоленовой кислоты (ALA, 18:3n-3); другие исследователи считают, что, даже если эти предшественники присутствуют в рационе, синтеза ARA и DHA недостаточно для удовлетворения дальнейших биосинтетических потребностей нервных мембран.Конечно, в течение первого года жизни происходит быстрое поглощение DHA и ARA мозгом младенца, что убедительно свидетельствует о ключевой роли этих PUFA в развитии нервной системы (Sinclair et al . , 2005).

В то время как материнское молоко содержит небольшое количество ARA и DHA, обычно от 0,2 до 1 % от общего количества жирных кислот молока, эти две жирные кислоты не содержатся в коровьем молоке или в детских смесях, если только они не были добавлены преднамеренно. Таким образом, аргумент был выдвинут за последние 12–15 лет (см., например, Uauy et al ., 1990; Хоффман и Уауи, 1992 г.; Карлсон, 1995; Huang and Sinclair, 1998), что обе жирные кислоты следует добавлять во все детские смеси. Если новорожденных детей вскармливают молочными смесями без добавок, то наблюдается неуклонное снижение уровней ДГК и АРК в крови вместе с потерей ДГК, но не АРК, из тканей головного мозга (Gibson et al. ., 1994; Farquharson). et al. ., 1995), что подтверждает утверждения о полезных добавках двух ПНЖК к молочным смесям.Кайл (2001) сообщил, что примерно с 1986 г. было проведено более 30 хорошо контролируемых клинических исследований с участием более 2000 младенцев, показывающих, что улучшение умственной и зрительной остроты было более значительным у младенцев, которых кормили либо материнским молоком, либо смесями с добавками ДГК, чем у детей, получавших ДГК. тех, кого кормят стандартными детскими смесями.

Дальнейшие исследования после этого отчета (см. Sinclair et al ., 2005) подтвердили эту точку зрения. Имеются также очень убедительные доказательства того, что недоношенные дети (т.е. дети, рожденные недоношенными) должны получать добавки как ARA, так и DHA (Crawford et al ., 2003), поскольку такие младенцы имеют минимальные жировые запасы и, вероятно, полностью зависят от поступления обеих длинноцепочечных ПНЖК. Эти авторы отмечают: «Подобно тому, как было обнаружено, что недоношенные дети нуждаются в потреблении белков, энергии и минералов, соответствующих плацентарному выбросу, так же вероятно, что им потребуется плацентарный выброс липидов, т.е. ARA и DHA». Они, по мнению авторов, лишаются младенца, поскольку не включаются в их смеси для вскармливания.Они используются почти всегда, поскольку такие младенцы с низкой массой тела, как правило, не могут питаться самостоятельно от своих матерей. Кроуфорд и др. . (2003) указали, что во время рождения, которое в настоящее время может быть за 15 недель до доношенного срока, недоношенный ребенок использует около 70 % своей энергии для развития и функционирования мозга, а сам мозг — 60 %. % липидов. «Неудивительно, — заключили эти авторы, — что системы, богатые мембранами, терпят неудачу в условиях стресса быстрого роста и нехватки тех самых веществ, которые необходимы для их роста и целостности.В настоящее время на уровне правительственного консультативного совета было проведено большое количество дискуссий о преимуществах включения ДГК и АРК в рацион младенцев, вскармливаемых исключительно смесями (см. Watkins, 2004; а также FSANZ, 2003). Рекомендации консультативных советов, связанных с правительствами США, Канады, Великобритании и других стран ЕС, Австралии и Новой Зеландии (см. Таблицу 23.1), поддерживают включение обеих жирных кислот, зная, что источники обоих материалов в обозримом будущем будут получены из микробных источников.Как уже говорилось в главе 5, микробный метод является единственным экономичным способом получения этих SCO.

Таблица 23.1. Избранные веб-сайты, посвященные принятию одноклеточных масел (SCO) в детских смесях по всему миру.

сокращения

FDA = US Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов, FSANZ = пищевые стандарты Австралии и Новой Зеландии, GRAS = общепризнанный безопасный продукт, CA = компетентный орган.

Источники:

[1]

Ежегодный отчет Консультативного комитета по новым продуктам питания и процессам (ACNFP) за 1996 год. /acnfp_report_1996

[2]

Государственный журнал Нидерландов, номер 48 от 8 марта 1995 г.

[3]

Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США, Ответное письмо Агентства, GRAS0 Уведомление № 4 GRN0 Not. Доступно на http://www.cfsan.fda.gov/~rdb/opa-g041.html

[4]

Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США, ответное письмо агентства, уведомление GRAS № GRN000080 Доступно на http://www.cfsan.fda. gov/~rdb/opa-g080.html

[5]

http://www.hc-sc.gc.ca/food-aliment/mh-dm/ofb-bba/nfi-ani/e_dhasco .html

[6]

http://www.foodstandards.gov.au/_srcfiles/fsc_1_3_4_Identity_&_Purity_v78.pdf

[7]

http://www. foodstandards.gov.au/_srcfiles/fsc_1_3_4_Identity_&_Purity_v78.pdffoodstandards.gov.au/_srcfiles/DHASCO%20and%20ARASCO%20in%20infant%20formula.pdf

[8]

http://www.martekbio.com/Nutritional_Products/Milestones.asp

6 90 ]. [10]

http://www.cfsan.fda.gov/~rdb/opa-g137.html

[11]

http://www.foodstandards.gov.au/_srcfiles/A428_FAR.pdf

[12]

http://europa.eu.int:80/comm/food/food/biotechnology/novelfood/notif_list_en.pdf

[13 ]

http://www.foodstandards.gov.au/_srcfiles/A522_DHA-rich_oil_FAR.pdf

Причина, по которой ARA включается в детские смеси вместе с DHA, заключается в том, что когда DHA вводится сама по себе, может быть снижением содержания АРА в крови, а это, в свою очередь, может быть связано с замедлением роста, хотя убедительных доказательств в поддержку этого нет (R.Gibson, цитируется Krawczyk, 2001). Поскольку ARA содержится в материнском молоке в количестве от 0,3 до 0,55 % от общего количества жирных кислот, считается, что добавление ARA в детскую смесь в худшем случае не причинит вреда, а в лучшем случае поможет поддерживать уровень DHA на должном уровне. соответствующий уровень. Однако неизвестно, почему АРА должна уменьшаться у младенцев, если в их рацион добавляется только ДГК, и один из ведущих диетологов в этой области, Роберт Гибсон, предположил, что это один из ключевых нерешенных вопросов детского питания с точная роль, которую ARA играет у младенцев, до сих пор совершенно неизвестна (Krawczyk, 2001).

Также представляется полезным совместное включение ДГК и АРК в рацион беременных женщин, особенно во втором триместре (Otto et al ., 2000), поскольку такие добавки значительно повышают уровень ДГК в жирных кислотах. эритроцитов и в плазме при сохранении АРА на исходном уровне. Тогда можно было бы выдвинуть аргумент, что такое улучшение уровня ДГК у матери обеспечит более чем достаточное поступление ДГК и АРК к плоду.Недавнее исследование (Forsyth et al. ., 2003), в котором изучалось развитие детей, получавших детскую смесь с добавками ARA/DHA от рождения до более позднего детства, показало, что у таких детей артериальное давление было ниже, чем у детей, которых кормили с формулой без добавок. Младенцы на грудном вскармливании были подобны детям на дополнительном питании. Был сделан вывод о том, что, поскольку кровяное давление человека имеет тенденцию отслеживаться от детства до взрослой жизни, раннее воздействие диетических ПНЖК с длинной цепью, например.г. ARA и DHA могут снизить риск сердечно-сосудистых заболеваний во взрослом возрасте.

Как уже указывалось выше, данные о преимуществах включения как ARA, так и DHA в смеси для детского питания были оценены рядом национальных регулирующих органов (см. Таблицу 23.1). Ключевое значение, вероятно, имело принятие Управлением по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США (FDA) в 2001 г. требования, сделанного им компанией Martek Biosciences Corp. (которые в то время были единственными производителями SCO с высоким содержанием ARA и DHA) о включении смесь ARASCO® и DHASCO® компании в детских смесях.Эта оценка предложения заняла три года и была основана на использовании масел, полученных, соответственно, из Mort . alpina и C. cohnii . Масла других организмов не учитывались. Таким образом, был сделан случай a priori , и он был одобрен всеми другими регулирующими органами, которым было предложено оценить эти заявления о вскармливании младенцев, для использования двух масел, даваемых в соотношении 2:1 (об./об.). ), где содержание как ARA, так и DHA составляет 40 % от общего количества жирных кислот в каждом масле.Комбинированные масла продаются Martek под торговой маркой Formulaid®, которые теперь доступны более чем в 60 странах.

Таким образом, имеется значительный объем данных, свидетельствующих как о немедленных, так и о долгосрочных преимуществах включения ARA и DHA в рацион новорожденных детей. Можно ожидать, что по мере проведения дальнейших исследований, они подтвердят эту точку зрения, делая производство этих SCO ключевым значением для пищевого благополучия детей во всем мире.

Влияние добавок смесей растительных масел на выработку омега-3 жирных кислот в Mortierella alpina CFR-GV15

Biomed Res Int. 2017; 2017: 1432970.

Ganesan Vadivelan

¹

¹ Микробиология и ферментация Департамент технологий, CSIR-Центральный пищевой технологический научно-исследовательский институт, Mysore, Индия

Pamidighantam Prabhakara Rao

² Resource Center, CSIR-Центральный пищевой технологический научно-исследовательский институт , Habsiguda, Hyderabad, India

Govindarajulu Venkateswaran

¹ Отделение микробиологии и технологии ферментации, CSIR – Центральный научно-исследовательский институт пищевых технологий, Майсур, Индия

¹ Центральный научно-исследовательский институт микробиологии и технологии ферментации, , Майсур, Индия

² Ресурсный центр, CSIR-Центральный научно-исследовательский институт пищевых технологий, Хабсигуда, Хайдарабад, Индия

Академический редактор: Фабиано Дж.Contesini

Поступила в редакцию 23 ноября 2016 г .; Пересмотрено 14 февраля 2017 г . ; Принято 12 марта 2017 г.

Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с лицензией Creative Commons Attribution, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии надлежащего цитирования оригинальной работы.

Эта статья была процитирована другими статьями в PMC.

Abstract

Цели этого исследования были разработаны для улучшения производства мицелиальных омега-3 жирных кислот с особым упором на EPA и DHA из масличного гриба Mortierella alpina CFR-GV15 в условиях глубокой ферментации при низких температурах с добавлением льняного масла и кресс-салата. масло как дополнительный источник энергии.Грибок выращивали при температуре 20°C в течение четырех дней, а затем при температуре 12°C в течение следующих пяти дней. Базовая среда содержала крахмал, дрожжевой экстракт и смесь льняного масла (LSO) и масла кресс-салата (GCO) в соотношении 1 : 1. биомасса составляла до 16,7  г/л сухого веса при общем содержании липидов 55,4% (по объему). Обогащение омега-3 жирными кислотами указывает на значительное увеличение биоконверсии жирных кислот (АЛК 32.2 ± 0,42%, ЭПК 7,9 ± 0,1% и ДГК 4,09 ± 0,2%), в 2,5 раза. Двухэтапное температурное культивирование изменяет жирнокислотный профиль за счет активации фермента десатуразы на клеточном уровне, благодаря чему значительно снижается содержание арахидоновой кислоты (АК). Можно сделать вывод, что Mortierella alpina CFR-GV15 представляет собой грибковую культуру, пригодную для коммерческого производства ПНЖК с обогащением ЭПК и ДГК.

1. Введение

Жирные кислоты омега-3, включая альфа-линоленовую кислоту, эйкозапентаеновую кислоту и докозагексаеновую кислоту, доказали свою кардиозащитную активность, нормализуют развитие нервной системы, противодиабетические, гипохолестеринемические и т. д. [1].Помимо вышеупомянутых физиологических преимуществ, ω -3 ПНЖК также оказались полезными для облегчения психосоматических расстройств, таких как настроение, депрессия, биполярное расстройство, шизофрения и деменция [2]. Zygomycetes fungi Mortierella sp. был идентифицирован как источник ПНЖК, в основном арахидоновой кислоты (АК) со средним значением 30–70%, и других ПНЖК, таких как линолевая кислота (ЛК), гамма-линоленовая кислота (ГЛК) и дигомо-гамма-линоленовая кислота ( DHGLA) на значительных уровнях [3].Прием пищи, содержащей больше арахидоновой кислоты, может привести к изменениям в виде избирательно усиленного воспаления или воспалительных реакций у людей [4]. Однако было замечено, что M. alpina могут накапливать жирные кислоты с длиной цепи C:20, включая EPA и DHA [5]. Следовательно, M. alpina можно использовать для накопления омега-3 ПНЖК путем активации ферментов десатуразы, а также путем изменения условий роста, таких как инкубация при низкой температуре на субоптимальных уровнях.В более ранних исследованиях сообщалось, что когда M. alpina инкубировали при низкой температуре 5°C, активировался термочувствительный фермент десатураза, который катализирует образование ЭПК из ДГЛК [6, 7]. Также было замечено, что снижение температуры вместе с добавлением растительного масла в качестве источника углерода запускает определенный предшественник жирной кислоты для образования полиненасыщенных жирных кислот с очень длинной цепью (VLC-PUFA), таких как EPA и DHA, в массе грибкового мицелия [8]. ]. В другом эксперименте было замечено, что добавление растительных масел в культуральную среду увеличивало содержание липидов в клетках с измененным составом жирных кислот.Таким образом, очевидно, что добавление растительных масел в качестве источника углерода влияет не только на структуру липидов, но также на длину и степень десатурации ацильных цепей [9]. В более ранних исследованиях Mortierella основное внимание уделялось глубинному культивированию, главным образом, скринингу более сильнодействующих штаммов, подходящих субстратов и условий культивирования [10–12]. Все предыдущие исследования этого гриба были сосредоточены на варьировании параметров культуры для усиления продукции омега-6 жирных кислот [13–15]. Растительные масла, содержащие различные жирные кислоты, служили предшественниками для биосинтеза длинноцепочечных жирных кислот (ДЦ-ЖК), и добавление растительного масла на уровне 1% в Mortierella alpina ATCC 32222 и микроводорослях Physcomitrella patens , как сообщается, увеличивает биомассу. с ПНЖК [16, 17]. Сообщается, что LSO и GCO являются богатыми источниками ALA и могут служить естественными предшественниками для производства ПНЖК с очень длинной цепью. Кроме того, GCO представляет собой высокостабильное масло, обладающее высокой концентрацией природных антиоксидантов, таких как токоферолы и каротиноиды [18].Настоящая работа была разработана, чтобы понять влияние добавок смеси масел LSO и GCO на липид M. alpina и его состав жирных кислот. Впервые сообщается о добавлении смеси масел (LSO и GCO) к липиду M. alpina при двухэтапной низкотемпературной инкубации для биоконверсии жирных кислот-предшественников для увеличения накопления EPA и DHA путем запуска активности Δ ^{5. ,6,17 Ферменты десатуразы} в клетках мицелия M.Альпина .

2. Материалы и методы

2.1. Микроорганизмы и техническое обслуживание

Новый штамм M. alpina CFR-GV15, маслянистого гриба, накапливающего арахидоновую кислоту, был отобран из образцов почвы в Западных Гатах Индии. Географические координаты места изоляции: 12°45′14.2351″ северной широты и 75°38′38.7031 восточной долготы.

2.2. Нуклеотидный, BLAST и филогенетический анализ

M. alpina CFR-GV15 культивировали в среде SYM при различных температурах: (а) 28°С в течение семи дней, (б) 20°С в течение семи дней и (в) ) 20°C в течение четырех дней, затем 12°C в течение пяти дней [6, 7].Геномную ДНК экстрагировали, нуклеотидную последовательность анализировали с помощью BLAST и депонировали в NCBI [19]. Далее ген омега-3-десатуразы подвергали полимеразной цепной реакции. Был разработан набор вырожденных праймеров, полученных из консервативных областей внутри генного кластера пяти микроорганизмов, продуцирующих ПНЖК. Геномную ДНК M. alpina CFR-GV15 использовали в качестве матрицы для ПЦР с амплификации. ПЦР проводили на термоциклере (Eppendorf, США), начиная с 50°С.7°C в течение 2 мин и при 54,7°C в течение 1 мин, затем 30 циклов по 1 мин при 7°C и 10 мин горячего старта при 95,7°C. Амплифицированный продукт ПЦР очищали с помощью QIA quick и окончательного удлинения в течение 10 мин при 72,7 ° C на колонках для очистки ПЦР (Qiagen, Германия) в соответствии с протоколом производителей. Очищенный продукт ПЦР гена 18S рРНК подвергали прямому секвенированию ДНК с использованием ген-специфических праймеров для ПЦР. Последовательность нуклеотидов была проанализирована с помощью BLAST [20], и определенные последовательности генов были отправлены в GenBank под номерами доступа {«type»:»entrez-нуклеотид»,»attrs»:{«text»:»KU517437″,»term_id» :»1044897266″,»term_text»:»KU517437″}}KU517437 гены омега-3-десатуразы.Полученные частичные последовательности генов выравнивали с помощью BLAST и строили филогенетическое дерево с помощью программы Phylogeny. fr [21]. Последовательности гена омега-3-десатуразы, полученные из NCBI, были {«type»:»entrez-нуклеотид»,»attrs»:{«text»:»AB118663″,»term_id»:»44885795″,»term_text»:»AB118663″ }}AB118663 (Lachancea kluyveri SK-FAD3), {«type»:»entrez-нуклеотид»,»attrs»:{«текст»:»AB182163.1″,»term_id»:»62084355″,»term_text»:» AB182163.1″}}AB182163.1 (Mortierella alpina) , {«type»:»entrez-нуклеотид»,»attrs»:{«текст»:»KF433065″,»term_id»:»5567″,»term_text «:»KF433065»}}KF433065 ( Mortierella alpina ATCC32222), {«type»:»entrez-нуклеотид»,»attrs»:{«text»:»HQ612176″,»term_id»:»318055777″,»term_text «:»HQ612176»}}HQ612176 (Mortierella alpina) и {«type»:»entrez-нуклеотид»,»attrs»:{«text»:»AY373823.1″,»term_id»:»38426732″,»term_text»:»AY373823.1″}}AY373823.1 (Saprolegnia diclina) . Метод присоединения к соседям с начальной загрузкой 500 повторов создал филогенетическое дерево. хиты BLAST, демонстрирующие значительную гомологию, были выровнены с помощью программы ClustalW [22], белковые последовательности были использованы для создания программного обеспечения genomic123. com. проводилась до более высокой температуры.

2.3. Приготовление смеси масел

Семена масличных культур, а именно горчицы, рисовых отрубей, сои, подсолнечника, льна и кресс-салата, были куплены на местном рынке. Семена измельчали ​​и экстрагировали с помощью аппарата Сокслета для выделения нелетучих масел гексаном (Rendell Tech, VELP Scientifica, Италия). Различные комбинации смесей масел «SFO», «RBO», «SBO», «MO», «GCO» и «CO» готовили индивидуально в соотношении 1 : 1. Физическое смешивание пищевых масел проводили по известному методу [23] путем непрерывного перемешивания смеси в течение 12 часов при комнатной температуре.

2.4. Культивирование

Посевную культуру готовили в 50 мл среды, содержащей (г/л) глюкозы, 20 г, и дрожжевого экстракта, 10 г; рН доводили до 6,0 и культуру инкубировали в течение 48 ч при 28 ± 0,2°С. Культуру инокулята готовили путем выращивания клеток в среде с крахмальным дрожжевым экстрактом (SYM) и имели следующий состав: (г/л) крахмал, 10 г; дрожжевой экстракт, 5 г; KNO ₃ , 10 г; KH ₂ PO ₄ , 1 г; и MgSO ₄ , 0,5 г. Неочищенные экстрагированные масла горчицы (MO), рисовых отрубей (RBO), соевых бобов (SBO), подсолнечника (SFO), льняного семени (LSO) и семян кресс-салата (GCO) были включены в среду для культивирования SYM на уровне 2% в качестве дополнительный источник углерода.Пищевые масла, богатые альфа-линоленовой кислотой (ALA), такие как LSO : GCO, добавляли в соотношении 1 : 1. pH доводили до 6,5 перед автоклавированием при 121°C в течение 15 мин. Культуры инкубировали при 20°С и выдерживали в течение четырех дней и переводили в стрессовые условия при 12°С еще на пять дней. Культуры непрерывно выдерживали на роторном шейкере (210  об/мин) в условиях погружения в течение всего периода в девять дней.

2.5. Сбор и определение сухой биомассы и экстракция липидов

Биомассу собирали после девяти дней инкубации и фильтровали через влажную муслиновую ткань, а поверхностно связывающее масло удаляли, тщательно смывая дистиллированной водой три раза, а затем твин-80 и твин-80. быстро промывают хлороформом. Биомасса была подвергнута свободной заморозке путем первоначального выдерживания при температуре -80°C в течение 4 часов, а затем высушена вымораживанием в течение 6–8 часов (свободная зона Labconco; Канзас-Сити, штат Миссури; США). Лиофилизированную биомассу измельчали ​​в мелкий порошок и помещали в гильзы размером 33 мм × 80 мм, а липид экстрагировали с помощью аппарата Сокслета (Rendell Tech, VELP Scientifica, Италия) с использованием гексана в качестве растворителя.

2.6. Аналитические методы и получение МЭЖК

Метиловые эфиры жирных кислот (МЭЖК) свежеполученного микробного масла M.alpina CFR-GV15 готовили из образца массой 20–40 мг по методу Моррисона и Смита [24] с небольшой модификацией. Для омыления использовали метанольный раствор KOH (1 мл), а в качестве метилирующего агента – 1 мл 14% BF ₃ (Sigma-Aldrich, США). Смесь инкубировали при 65°С в течение 1 ч. Производные липиды экстрагировали гексаном, к слою растворителя добавляли 1 мл воды и центрифугировали при 8944×g в течение 5 мин. Слой гексана выпаривали в токе N ₂ и растворяли в 1 мл бензола, и нежелательные твердые вещества снова удаляли центрифугированием при 8944×g в течение 3 мин.Газохроматографический анализ МЭЖК проводили на 30-метровой капиллярной колонке RTX-2330 (плавленый кварц) с внутренним диаметром 0,25  мкм и внутренним диаметром м (Shimadzu 2014, Япония). Температуру колонки запрограммировали как 160°С (исходная) и повышение температуры со скоростью 5°С/мин до 250°С с выдержкой 10 мин. Газ-носитель – азот с общей скоростью потока 49,5 мл/мин. Температура инжектора и детектора составляла 240°С и 250°С соответственно. Жирные кислоты идентифицировали путем сравнения со стандартными эталонными (C4–C24) метиловыми эфирами жирных кислот (МЭЖК) (Sigma-Aldrich, St.Луи, Миссури).

2.7. Статистический анализ

Все эксперименты были проведены в трех повторностях, и данные об экспериментальной микробной биомассе и продукции ПНЖК были подвергнуты дисперсионному анализу и критерию множественного диапазона Дункана ( P ≤ 0,05) с использованием программного обеспечения SPSS 16. 0.

3. Результаты

В наших более ранних исследованиях M. alpina CFR-GV15, культивированный в глюкозе, базальной среде с дрожжевым экстрактом и pH от 6 до 6,5 и инкубированный при 28 ± 0,2°C в течение 7 дней, давал максимальное содержание липидов. из 44.3 ± 0,3% биомассы в пересчете на сухую массу. ГХ анализ общих липидов выявил наличие ЭПК (3,40 ± 0,1%), ДГК (4,32 ± 0,1%) и n-6 ПНЖК АК (56,7 ± 0,2%) [19]. Значительно более высокое накопление АК было достигнуто в течение семи дней ферментации. В настоящем эксперименте было замечено, что M. alpina CFR-GV15 при выращивании при 20°C в течение четырех дней давали значительное количество АК, а при продолжении при пониженной температуре 12°C в течение еще пяти дней приводили к усилению содержания ЭПК и ДГК и значительно сниженного уровня АК.Повышение ПНЖК можно объяснить триггером активности фермента Δ ^5,6,17 десатуразы внутри клетки. Кроме того, морфология этого гриба в питательной среде при 20°C во время лаг-фазы была сферической, в ранней логарифмической фазе между 72 и 96 ч в виде полугранулы, а в логарифмической фазе между 96 и 216 ч – огромной мякотной структурой, когда культура была перенесена на низкую температуру 12°C. Точно так же рН среды культивирования первоначально составлял 6,5, постепенно увеличиваясь до 7.1 на 96 ч периода роста и 5,4 на 216 ч. Также было замечено, что профиль жирных кислот биомассы менялся в зависимости от времени инкубационного периода. Максимальные количества ГЛК, ДГЛК и АК наблюдались через 96 часов при 20°С, а более высокие уровни ЭПК и ДГК – через 216 часов при 12°С. На рис. Жирнокислотный профиль различных смесей масел представлен в . Влияние отдельных добавок масла в среду на состав омега-3 жирных кислот биомассы было критически проанализировано, и результаты указаны на рис.Культуральная среда с добавлением индивидуального пищевого масла, богатого ПНЖК, показала увеличение биомассы с их основной жирной кислотой в биомассе клеток. LSO давал наибольшую биомассу, за которой следовала добавка CO. Также было замечено, что культуральная среда, дополненная обычными растительными маслами, давала низкий выход биомассы, липидов и индивидуальных уровней ПНЖК по сравнению с маслами, богатыми АЛК, такими как GCO, CO и LSO, когда добавление LSO в ростовую среду могло быть способность превращать DHGLA в EPA под действием ферментов десатуразы Δ ^5,6 , и аналогичным образом добавление LSO приводило к максимальному выходу DHA, за которым следовали добавки CO и GCO. Это может быть связано с активацией фермента десатуразы Δ ¹⁷ в клетках. Уровни EDA, ETA и AA были снижены во время этого процесса, что может быть связано с метаболической конверсией в пути жирных кислот. LSO смешивали с другими растительными и пищевыми маслами, чтобы установить метаболические изменения для улучшения производства жирных кислот, особенно жирных кислот омега-3. Основная комбинация пищевого масла, такая как LSO-GCO; ЛСО-СО; и CO-GCO показали значительно ( P ≤ 0.05) увеличение биомассы и ω -3 жирных кислот; в частности, EPA и DHA в конце периода культивирования и профили GC показали, что содержание АК резко снижается в этих условиях. Точно так же комбинации растительных масел LSO-SBO; ЛСО-РБО; ЛСО-МО; и LSO-SFO показали очень меньшую конверсию AA (). Однако, когда смеси LSO-GCO, LSO-Co и GAO-CO использовались в качестве добавок к источнику углерода, снижение AA было значительным, и наблюдалось дополнительное увеличение содержания EPA и DHA.Было обнаружено, что во всех экспериментах со смешанными масляными добавками уровень АЛК оставался почти постоянным для всех смесей.

Таблица 1

Состав жирных кислот пищевых и растительных масел.

CO1 C14: 03 ND511 C16: 013 15,6 ± 0,13 3,2 ± 0,01 C18: 113 42,2 ± 2.0913 44,2 ± 0,71 C18: 2511 C18: 3513 ND3 ND3 ND1 C21: 03 ND1 C22: 13 ND3 ND3 ND3 50. 2 ± 1,33 ND ND

жирные кислоты (%)	LSO	GCO	CO
3 MO	RBO	SBO	3 SFO
0,6 ± 0,2	0,4 ± 0,2	НО	НО	0.4	ND	ND
11,2 ± 0,3	12,3 ± 0,0	2,7 ± 0,0	2,7 ± 0,0	23,4 ± 1,1	16,3 ± 1,3	6. 4 ± 0,3
C18: 0	: 0	2.1 ± 0,4	2,6 ± 0,8	3,4 ± 0,1	1.3 ± 0,2	2.1 ± 0,2	2.3 ± 1,1	3.2 ± 0,0
18,4 ± 2,2	22,7 ± 1.2	14,3 ± 0,8	13,2 ± 0,7	13,2 ± 0,7	26,4 ± 1,4
6,3 ± 2. 1	11,9 ± 3.1	8,5 ± 0,2	14,7 ± 0,2	30,5 ± 0,2	49,9 ± 2,1	46,2 ± 2.2
56,4 ± 0,3	34,2 ± 1,0	61,3 ± 0,5	16,5 ± 0,1	1,4 ± 0,7	3,3 ± 0,3	НО
C20:0	0.4 ± 0,8	13,2 ± 0,3	0,3 ± 0,2	1,7 ± 1,5	ND
0,22 ± 1,7	3,8 ± 0,0	0,23 ± 0,1	ND	ND	ND
ND
SFA%	17.7 ± 2.6	13.8 ± 1.1	15.7 ± 0.1	4.0 ± 0.3	25.5 ± 1.3	20.6 ± 2.4	9.6 ± 0.3
MUFA%	18.4 ± 2.2	22.7 ± 1.2	20.3 ± 0.8	13.2 ± 0.7	42.2 ± 2.0	26. 4 ± 1.4	44.2 ± 0.7
PUFA%	62.7 ± 2.4	46.1 ± 4.1	69.8 ± 0.7	31.2 ± 0.3	31.9 ± 0.9	53.2 ± 2,4	46,2 ± 2,2

Таблица 2

Жирнокислотный состав различных смесей масел.

Жирная кислота (%)3 0,11 ± 0.11 C16: 0511 C18: 013 14,7 ± 0,313 14,9 ± 0,71 C18: 3911 C20: 03 3.1 ± 0,23 1,3 ± 1,03 2.0 ± 0,01 Другие3 0,2 ± 0,33 13,2 ± 0,713 31,2 ± 0,73 17,8 ± 1,113 61,3 ± 2,43 68,2 ± 3.0

3 LSO: SBO	LSO: RBO	LSO: MO	LSO: SFO	LSO: GCO	LSO: CO	CO: GCO
C14:0	0,32 ± 0,6	0,4 ± 0,2	0,2 ± 0,0	0,18 ± 0,3	0,2 ± 0. 1	0,17 ± 0,0
6,1 ± 2,1	8,4 ± 0,1	8,4 ± 0,1	0,2 ± 0,2	2,1 ± 0,2	7,3 ± 0,2	6.8 ± 1,0	6,8 ± 0,5
4,3 ± 1,1	2,3 ± 0,2	2.1 ± 0,2	1,3 ± 0,2	3,2 ± 0,0	3,2 ± 1,0	3. 6 ± 1,1	3,8 ± 0,2	4,4 ± 0,2
C18 :1	26,4 ± 1,4	38.2 ± 1,0	13,2 ± 0,7	13,2 ± 0,7	31,2 ± 0,7	21,9 ± 2,1	16,4 ± 0,7	17,8 ± 1,1
C18: 2	29,3 ± 2,1	24,3 ± 1,2	19,7 ± 1,9	37,7 ± 1,8	12,1,80060	12. 1 ± 0,8
27,3 ± 0,3	21,4 ± 0,7	26,5 ± 0,1	23,2 ± 1,2	44.7 ± 1,7	47,3 ± 2.1	51,3 ± 2.3
0,3 ± 0,0	0,3 ± 0,0	0,23 ± 0,4	1,2 ± 0,5	0,22 ± 0,2	0,2 ± 0,2	2,6 ± 0,2	0,2 ± 0,2
C21: 0	2. 2 ± 0.2	2.1 ± 0.1	2.1 ± 0,1	35,2 ± 1,3	0,5 ± 0,1	3,6 ± 0,1	1.5 ± 0,0	2,14 ± 0,0
C20: 4	3.1 ± 0,4	2,2 ± 0,3	1.3 ± 0,6	1,8 ± 0,3
0,9 ± 0,6	1.2 ± 1,2	1,3 ± 0,1	0,7 ± 0,2	2. 3 ± 1,4	4,4	4,7 ± 2,1
SFA%	10,4 ± 3,2	10,4 ± 0,3	10,5 ± 1,0	1,5 ± 1,0	5,3 ± 0,2	5,3 ± 0,2	10,9 ± 1,4	10,6 ± 1,2	11,2 ± 1,3
МНЖК%	26.4 ± 1,4	38,2 ± 1,0	21,9 ± 2,1	16,4 ± 0,7	16,8 ± 1,1
PUFA%	59,7 ± 2,8	47,9 ± 2. 2	46,2 ± 2,6	62,7 ± 3.3	56,9 ± 2,7

Таблица 3

Влияние отдельных растительных и смешанных нефтяных добавок в качестве источника углерода на М. Альпина CFR-GV15 на производство биомассы, общего липида и омега-3 жирных кислот.

1-

4 )

1 GY Medium1 MO3 6.3 ± 0,1 ^{F F F F} 3 ND3 ND3 37,6 ± 0,2 ^{г. B} 3 0,7 ± 0,1 ^E 3 7,0 ± 0,0 ^{E E E} 3 34,4 ± 0,8 ^E 3 ND3 ND3 32,6 ± 0,8 ^C 3 1.1 ± 0,1 ^E 3 0,4 ± 0,2 ^б 3 26,5 ± 0,2 ^{г г г} 3 ND3 26.1 ± 0,3 ^{D D} 3 2,8 ± 0,3 ^C 3 0,1 ± 0,1 ^C 3 32.7 ± 0,3 ^{F F F} 3 ND3 25,1 ± 0,0 ^{D D} 2,4 ± 0,0 ^D 3 0,3 ± 0,1 ^C 3 8,6 ± 0,1 ^{д d} 3 34,2 ± 0,03 5,5 ± 0,0 ^{E E E} 3 2,2 ± 0,1 ^{D D} 3 0,5 ± 0,0 1 CO3 11. 8 ± 0,2 ^B 3 57,9 ± 0.0 ^{F F} 3 3.4 ± 0,1 ^B 3 0,2 ± 0,8 ^C 1 LSO3 13,3 ± 0,2 ^{A E} 3 5.6 ± 0.2 ^{A A} 3 0,7 ± 0.1 ^B 513333 ^{C C C C C} 3 38,2 ± 0,3 ^D 3 1,0 ± 0,0 ^E 1 LSO + SBO3 7.5 ± 0,2 ^{D D 13 44,2 ± 0,1 D 13 39,6 ± 0,4 D D 3 26,2 ± 0,1 B} 3 0,1 ± 0,8 ^{E E} 1 LSO + RBO3 6,6 ± 0,2 ^{E E} 3 40,0 ± 0,4 ^{E E} 3 43,1 ± 0,2 ^{г. B} 3 22,1 ± 0,1 ^{C D E E E} 13 7.5 ± 0,1 ^{D D 13 36,8 ± 0,4 F} 3 28,5 ± 0,4 ^{A F E E E} 1 LSO + GCO3 55,4 ± 0,3 ^A 3 32,0 ± 0,4 ^E 3 3.8 ± 0.0 ^B 1 LSO + CO3 15,3 ± 0,2 ^{г. B} 48,2 ± 0,3 ^{млрд. Б г. B} 3 40,4 ± 0,7 ^{C E C C C C C A} 1 GCO + CO ^{B 13 46,7 ± 0,3 B} 3 47,6 ± 0,9 ^{A D B} 3 1,3 ± 0,0 ^C 88

Масляная добавка	Сухая биомасса (г/л)	Общий липид (% по массе)	Содержание жирных кислот (% по массе)
			20: 4 (N-6)	20: 5 (N-3)	3 22: 6 (N-3)
10,8 ± 0,1 C	44. 3 ± 0,3 б	0,02 ± 0,0	56,7 ± 0,2 а	3,4 ± 0,1 б	4.3 ± 0.1 A
0,4 ± 0,1 C
RBO
СБО	4. 5 ± 0.2 G
SFO	7.3 ± 0,1 E
GCO	37.8 ± 0,0 D
42,5 ± 0.3 C
49,8 ± 0,4 а	55.1 ± 0.3	4.0 ± 0.8 E
LSO + SFO	26,5 ± 0,1 B	1. 0 ± 0,1 D
1.5 ± 0.1 D
1,6 ± 0.3 D
41,7 ± 0,1 C	0,7 ± 0,4 F
16. 7 ± 0,2 A	2,84 ± 0,1 ж	7.9 ± 0,1 A
6.02 ± 0.1 E
15,1 ± 0,5 B	8,7 ± 0. 1 D	4,3 ± 0,9 B

В эксперименте было обнаружено, что во время этапа роста М. Альпина при 20 ° C с LSO : GCO в качестве смешанной масляной добавки, максимальные количества АК (7,3 ± 0,0) и АЛК (46,2 ± 1,3) наблюдались на четвертый день, которые впоследствии снизились до 2,9 ± 0,2 и 32,2 ± 0,7 соответственно после 9-го дня со снижением температура от 20°С до 12°С (). Тенденция к увеличению ЭПК (20:5, n-3) и ДГК (22:6, n-3) за тот же период наблюдалась с 2.от 8 ± 0,2 до 7,9 ± 0,1 и от 0,6 ± 0,0 до 4,09 ± 0,2 соответственно ().

Таблица 4

Влияние селективной смеси масел LSO : GCO и инкубации при низкой температуре после 4–9 дней эффективности биоконверсии АЛК в M. alpina CFR-GV15.

3 0,4 ± 0,4513 8,7 ± 0.213 C18: 013 15,3 ± 2.1513 8,6 ± 2.13 8,6 ± 2.1911 C18: 3 (N-3)13 44,0 ± 1,33 43,0 ± 1,3513 6,8 ± 1,013 5.8 ± 1,013 0,8 ± 1,03 1,0 ± 0,53 1,0 ± 0,5911 C20: 4 (N-6)13 2,1 ± 0,813 2,3 ± 0,23 0,3 ± 0,0513 (N-3)3 5,9 ± 0,13 7,9 ± 0,11 C22: 6 (N-3)3 0,6 ± 0,0

Жирная кислота (%)	20 ° C-12 ° C Низкие температуры (4-9 дней)
4	6		6	70046
C14:0	0. 4 ± 0,1	0,5 ± 0,0	0,5 ± 0,1	0,6 ± 0,1	0,6 ± 0,0	0,6 ± 0,0	0,3 ± 0,3
C16: 0	9,8 ± 0,4	9,9 ± 0,4	10,4 ± 1,2	10,3 ± 0,7	10,4 ± 3.1
0,6 ± 1,3	0,7 ± 1,7	0,8 ± 2,5	0,8 ± 1,2	0,7 ± 1,2	2,5 ± 1,1	5. 3 ± 0,0
С18:1	12.4 ± 0,5	13,4 ± 1,1	13,4 ± 1,1	15,5 ± 0,1	18,0 ± 0,1	20,7 ± 1,3
C18: 2	12,6 ± 2,1	13,2 ± 0,7	14,1 ± 0,3	12,4 ± 0,4	10,6 ± 0,0
46,2 ± 1,3	40,0 ± 2. 3	34,3 ± 0,1	32,2 ± 0,7
C20:0	4.3 ± 0,4	6,8 ± 1,0	5,9 ± 1,8	6.8 ± 0,4	8,7 ± 0,4
C20: 1	C20: 1	0,6 ± 0,2	0,3 ± 0,6	0,2 ± 0,6	0,2 ± 0,7
7,3 ± 0,0	6,3 ± 0,0	6,3 ± 0,5	6,2 ± 0,2	6,9 ± 0,5	5. 2 ± 0,0	2,9 ± 0,2
С20:5(n-6)	2.4 ± 0,1	2,1 ± 0.2	2,5 ± 1,1	2,5 ± 0,0
2,8 ± 0,2	4,3 ± 0,0	4,2 ± 0,1	4,7 ± 0,0	4,7 ± 0,1
0,9 ± 0,1	1,4 ± 0,1	1. 6 ± 0,1	2,3 ± 0,2	3,8 ± 0,2

Штамм гриба M.alpina CFR-GV15 был выделен и идентифицирован с использованием 18S рРНК. Последовательности грибов сравнивали с известными последовательностями 18S рРНК из GenBank и EMBL с использованием поисковой системы BLAST (https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi). Выведенная аминокислотная последовательность омега-3-десатуразы M. alpina была подвергнута анализу BLAST (). Далее была выбрана ближайшая относительная экспрессия гена и сопоставлена ​​с помощью ClustalW ().

Филогенетический анализ разнообразия генов омега-3-десатуразы между производителями длинноцепочечных ЭПК и ДГК.

Множественное выравнивание последовательностей Mortierella alpina CFR-GV15 при различной температуре в зависимости от экспрессии гена омега-3-десатуразы. Выведенную аминокислотную последовательность омега-3-десатуразы M. alpina подвергали BLAST-анализу, после чего отбирали ближайшие родственники по экспрессии генов и выравнивали с помощью ClustalW.

4. Обсуждение

Мортиерелла вид. Было обнаружено, что в зависимости от среды ферментации, соотношения C/N, рН и температуры образуются высокие концентрации ПНЖК.В настоящем эксперименте М. alpina

, выращенные при двухэтапном изменении температуры, а именно, 20°C и 12°C соответственно, в течение девяти дней продуцировали липиды с более высоким содержанием EPA и DHA, вызывая Δ ⁵ , Δ ⁶ и Δ ¹⁷ десатуразы в клетке. Снижение содержания АЛК и увеличение содержания ЭПК и ДГК в профиле жирных кислот ясно указывает на то, что фермент десатураза участвует в превращении. Несколько исследований ясно показали, что Δ ⁵ десатураза, фермент, катализирующий превращение DGLA в AA, может быть ингибирована присутствием некоторых масел, содержащих ПНЖК, в питательной среде [10, 25, 26]. Состав среды SYM несколько изменили, заменив глюкозу картофельным крахмалом, некоторыми растительными маслами и комбинацией масел в качестве дополнительных источников углерода. Джанг и др. [16] и Nisha и Venkateswaran [10] сообщили, что pH 6,5 был оптимальным для образования большего количества арахидоновой кислоты в клетках мицелия

M. alpina за пять-семь дней инкубации. В настоящих экспериментах параметры были сходными; однако культуру инкубировали при двух температурных условиях. Другое исследование показало, что этот штамм эффективно использовал простые сахара для роста и производства полиненасыщенных жирных кислот [10, 27].Существенным фактом является то, что утилизация масел микроорганизмами сопровождается продукцией внеклеточных липаз, отщепляющих остатки жирных кислот от глицерина. Более того, продукция жирных кислот может либо включаться в липидные структуры, либо расщепляться до основных скелетов, служащих для синтеза биомассы [10, 28]. Аналогичные наблюдения были сделаны Ахтаром, Койке и др. , Рэтледжем, Хао и др., а также Хао и др. [11, 15, 28–30]. В нашем предыдущем отчете указывалось, что различные источники добавок N ₂ в питательную среду изменяют профиль жирных кислот в Mucor rouxii CFR-G15 с использованием [11] RSM и Mortierella alpina CBS 528.72 значительно. Исследование также показало, что сочетание как органических, так и неорганических источников азота дает наибольшую биомассу клеток [10, 31]. В настоящем эксперименте культуральная среда была включена с органическими и неорганическими N ₂ , и в профилях жирных кислот липидов наблюдались широкомасштабные изменения. Изменения, наблюдаемые в рН, могут быть связаны с использованием источников азота из питательной среды. Таким образом, мы можем сделать вывод, что источники углерода, азота, масляные добавки и температура играют существенную роль в преобразовании ПНЖК в желаемые жирные кислоты, такие как ЭПК и ДГК в М.alpina штамм CFR-GV15. Все эти наблюдения совпадают с исследованием Shinmen et al. [32], где они сообщили, что добавление масел позволило клеточной биомассе преобразовать субстраты жирных кислот C18 в LC-PUFA. Добавление МО, РБО и СФО в среду увеличивает накопление АК и стимулирует рост клеток и биоконверсию АК в ЭПК и ДГК липогенным путем на клеточном уровне [33], а добавление масел стимулирует рост клеток и формирование продукции ПНЖК в м.альпина ATCC 32222 [16]. Процентное содержание АК до превращения ЭПК и ДГК составляло 56,7%, которое снижалось до 6,95% на седьмой день инкубации, 5,2% на восьмой день и 2,9% на девятый день (10). Точно так же было показано, что эффективность конверсии АЛК в среде SYM со смешанным маслом также составляет 40% на седьмой день при 12°C, которая снижается до 34,3% на 8-й день и 32,5% на девятый день. Это можно объяснить более высокой степенью активации фермента десатуразы Δ ¹⁷ при более низкой температуре и последующей биоконверсией ДГЛК в ЭТА и АК в ЭПК и ДГК ().В этом штамме наблюдалось редкое явление, когда смесь LSO : CO добавлялась в среду для выращивания и инкубировалась при низкой температуре, происходило превращение EDA в DHA, более высокая степень активации фермента десатуразы (данные не представлены). Смешанное масло LSO : GCO 1 : 1 во время ферментации показало значительное увеличение конверсии жирных кислот (ALA 32,2 ± 0,42%, EPA 7,9 ± 0,1% и DHA 4,09 ± 0,2%), а также наблюдался промежуточный продукт. Несколько исследований [13, 32, 34] показали, что содержание ЭПК в мицелии может быть увеличено путем культивирования грибов с льняным маслом, которое содержит высокую долю альфа-линоленовой кислоты (АЛК).Аналогично, штамм

M. alpina также демонстрирует более высокую продукцию ЭПК при добавлении отдельных масел, содержащих АЛК, таких как масло LSO 3% в среде при 12°C, где накопление ЭПК достигало 66,6 мг/г сухого мицелия [34]. ]. Базовая среда, содержащая растворимый крахмал в качестве источника углерода в сочетании с льняным маслом в соотношении 2 : 1 в течение 7 дней инкубации, давала 3,56% ЭПК и 0,18% ДГК [33]. M. alpina 1S-4 продуцировал ЭПК (примерно 10% от общего количества жирных кислот) при температуре роста ниже 20°C [25].В другом отчете добавление растительного масла M. alpina ATCC 32222 с 1% льняного масла или подсолнечного масла по отдельности при 20°C в течение трех дней, а затем при 12°C в течение пяти дней привело к максимальному выходу ЭПК (3,56 ± 0,23%). ) и ДГК (0,23 ± 0,03%) [16]. При использовании дефектного мутанта десатуразы было получено масло, богатое ЭПК, с низким уровнем АК; Mut48 превращал экзогенную ALA в EPA [35].

Таблица 5

Влияние изменения температуры и смешанного масла на выработку омега-3 жирных кислот.

988

Жирная кислота (%)
Управление1 C14: 03 0,2 ± 0. 13 0,2 ± 0,03 0,4 ± 0,03 0,4 ± 0,41 C18: 11 C18: 21 C18: 3 (N-3)3 53.2 ± 0.23 32,2 ± 0,23 1,0 ± 0,51 C20: 4 (N-6)3 1,2 ± 0,13 Na3 0. 3 ± 0,01 C20: 5 (N-3)13 3,4 ± 0,0

3 LSO: GCO A Смесительное масло	Управление Без смесивания нефть B	Смесительная добавка нефти с низкой температурой при 20 ° C до 12 ° C C
C16: 0	9.1 ± 0,0	8,4 ± 0,0	8,4 ± 0,2
C18:0	2.7 ± 0,4	5.1 ± 0.3	5.3 ± 0,0
8,8 ± 0,3	6,2 ± 0.5	6,2 ± 0,5	20,7 ± 1,3
7,0 ± 0,0	6. 7 ± 0,5	8,6 ± 2.1
5.6 ± 0,2
C20: 0	Na	Na	8.7 ± 0,4
С20:1	5.3 ± 0,0	3.0	3,4 ± 0,3
56,7 ± 0,2	2,9 ± 0,2
C20: 5 (n- 6)	0,04 ± 0,0	Na
Na	7,9 ± 0,1
C22: 6 (N- 3)	NA	4,3 ± 0,6	4,09 ± 0,2

5. Заключение

М.alpina CFR-GV15, новый изолят из почв Западных Гат в Индии, продуцировал 16,7 г/л сухой массы биомассы (DW) и 55,4% общего содержания липидов при понижении температуры в присутствии смеси масел LSO : GCO при 2% уровень в ферментационной среде. Превращение ω -6 жирных кислот, таких как GLA, DHGLA и AA, в ω -3 жирных кислот, особенно EPA и DHA, стало возможным благодаря изменению пути с использованием элонгазы, а также Δ ^{6, 5,17} ферментов десатуразы.

Настоящее исследование также показало, что M. alpina CFR-GV15 продемонстрировали значительно повышенное накопление VLC-PUFA при добавлении смешанного масла по сравнению с добавлением одного масла. Растущее применение ЭПК и ДГК и их ограниченных традиционных источников привело к обширному поиску альтернативного производства. В последнее время все более популярными становятся возобновляемые источники ЭПК и ДГК из генетически модифицированных водорослей, дрожжей, грибков или других микроорганизмов. Кроме того, процессы на основе микроорганизмов могут быть надежными, экономичными и привлекательными для крупномасштабного производства ЭПК и ДГК.

Благодарности

Авторы признательны Индийскому совету медицинских исследований (ICMR), Нью-Дели, Индия, за предоставление исследовательской стипендии (3/1/2/28/2011-RHN) Ганесану Вадивелану. Авторы выражают благодарность профессору Раму Раджасехарану, директору CSIR-CFTRI, за поддержку, а также г-же Аше и г-ну Бхавани Эсварану из Центрального инструментального центра за проведение анализа ГХ и ГХ/МС.

Конфликт интересов

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов в связи с публикацией данной статьи.

Ссылки

1. Доуман С. Д., Крупанидхи С., Сандживи С. Б. Жирные кислоты омега-3 для питания и медицины: рассмотрение масла микроводорослей в качестве вегетарианского источника ЭПК и ДГК. Текущие обзоры диабета . 2007;3(3):198–203. doi: 10.2174/1573391368968. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]2. Фримен М. П. Жирные кислоты омега-3 в психиатрии: обзор. Анналы клинической психиатрии . 2000;12(3):159–165. doi: 10.1023/a:100906

KQED | Стелла Альпина Остерия

Имя: Patrick
Количество занятий: Менеджер по эксплуатации Местоположение: Redwood City
Любимый ресторан: STELLA ALPINA OSTERIA
REAL STELLA ALPINA OSTERIA: Суббота 16 февраля 2008 г.

Наши вечер был просто идеальным.Как всегда, Алиса (владелец / владелец) улыбалась и обнималась, когда мы вошли в дверь. Она приготовила для нас идеальный столик в причудливом отапливаемом патио. Мы начали с отличного предложения вин от Ямилы (одного из лучших официантов в районе залива) из Liberty School Syrah 2005 года. Винная карта обширна с ценами на любой бюджет. У них есть интересный выбор итальянских вин и местного разнообразия.

У нас была улитка Stella Alpina, которая была идеально запечена с оливковым маслом, чесноком, луком-шалотом и петрушкой. Улитки были свежими и ароматными, и мы наслаждались всем этим с хрустящим хлебом. У меня были улитки во многих типах ресторанов со смешанными результатами, но это было одним из лучших. Insalata Stella была хрустящей и терпкой с масляным салатом, грецкими орехами, горгонзолой, клюквой и свежим цитрусовым винегретом. Что касается основного блюда, тушеные короткие ребрышки таяли во рту, отставая от кости. Баланс запеченного блюда из макарон ригатони с короткими ребрышками был идеальным сочетанием. Трюфельное масло хорошо смешивается с корочкой Пармиджано.Я с осторожностью отношусь к посетителям, когда вижу в меню что-нибудь с «трюфелем», так как может показаться, что меня покупают. Использование трюфельного масла в блюдах этого ресторана прекрасно заявлено как фон, а не передний план. Размер порций был идеальным для двух человек. Полента с маскарпоне идеально подходила к коротким ребрышкам. На десерт капучино без кофеина с карамельным мороженым был сладким (но не подавляющим) завершением трапезы.

Вечер был, одним словом, классный. Обслуживание, качество, вкус — все на высшем уровне.Музыка была соответствующей. Обслуживание не навязчивое, но очень внимательное. Ресторан был очень чистым и привлекательным (даже ванные комнаты!). На столе были свежие розы. Каждый раз, когда я иду в этот ресторан, я сажусь, чтобы насладиться вкусом. Это настоящее воплощение итальянской альпийской кухни. Маттео, владелец / шеф-повар, дважды выходил из кухни, чтобы убедиться, что нам все нравится. Это ресторан, в который можно пойти и насладиться непринужденной едой. Мы обедали более двух с половиной часов.Я предлагаю вам не торопиться, чтобы насладиться каждым курсом с невероятным вином. Я настоятельно рекомендую вам проверить это место!

Имя: EMMA
Количество занятий: Директор кадров
Расположение: San Francisco
Любимый ресторан: Bette OceanView Diner
Review STELLA ALPINA OSTERIA: Суббота 23 февраля 2008 г.

Это было темная и бурная ночь… это было! Но мы бросили вызов стихии и поехали на нашем City CarShare в Берлингейм, чтобы ранним субботним вечером зарезервировать столик в Stella Alpina Osteria.Нас тепло встретили, и было очевидно, что они относятся к постоянным клиентам как к семье.

После того, как мы уселись за симпатичный угловой столик у окна, наш очень дружелюбный официант рассказал нам о специальных предложениях и дал нам немного времени, чтобы принять решение. Решение было трудным, мы оба любим итальянскую кухню, но мы остановились на карпаччо и специальных ньокки, фаршированных трюфелем, с коричневым маслом и соусом из шалфея для начала, я выбрал оссобуко из телятины в качестве основного блюда, а моя милая выбрала еще одно блюдо. , домашняя паста с креветками и грибами.

На стол поставили немного теплого хлеба и вскоре принесли наши закуски. Карпаччо было удивительно легким и чистым на вкус, а пармезан — соленым и богатым комплиментом. Ньокки были украшением шоу; они были совершенно потрясающими. Мне было грустно делиться, но я был счастлив иметь хлеб, чтобы впитать этот вкусный масляный соус после того, как пушистые трюфельные облака исчезли.

Оссобуко и паста вышли и на очень горячих тарелках были поставлены перед заказчиком без вопросов со стороны кого-то, помогающего нашему официанту.Всегда приятно, когда тебе не нужно поднимать руку, как в начальной школе, чтобы получить заказанный ужин. Оссобуко был бархатистым и вкусным, а домашняя паста яичной и очень вкусной.

Мы разделили тирамису на десерт и выпили капучино с самым итальянским вкусом со времен нашего медового месяца в Италии. Приятно было найти маленькие анисовые бискотти рядом с каждой чашкой.

Подводя итог: еда была очень хорошей. Это было то, на что, как мне кажется, была бы еда, если бы у меня была бабушка-итальянка.Удручающей была поездка из Сан-Франциско; У меня не было вина, которое я хотел бы сочетать с нашей едой. Еще одним раздражением был очень громкий стол рядом с нами, который продолжал спорить друг с другом, но я, конечно, не виню ресторан за это.

Я определенно буду есть здесь снова (особенно во время сезона трюфелей), но надеюсь, что кто-то еще будет водить машину.

Имя: Количество занятий: COMEDIAN
Местонахождение: San Francisco
Любимый ресторан: CHOU CHOU
Reviewed Stella Alpina Osteria: вторник 19, 2008 г.

Ну, это завершило идеальное «три на три» насколько я понимаю! Несмотря на свое длинное название, «Stella Alpina Osteria» была элегантной, но уютной во всех смыслах.

Очень интимная обстановка, немного ниже уровня улицы, что придает ему ощущение «спикзи». Небольшие столики на двоих или четверых, каждый с миниатюрными розами на столе, в сочетании с крошечным баром придают этому месту особую клубную атмосферу. Нас приятно встретили («обязательно» для меня), и внимательный и информированный официант, который принял наши заказы на напитки, сразу же дал ночные блюда.

Одним из признаков хорошего итальянского ресторана является то, насколько хорошо они готовят Negroni, коктейль из равных частей джина, сладкого вермута и Campari с очень важным оттенком апельсина.Эта смесь НЕ могла быть лучше приготовлена! Так много мест не замечают, насколько важны первые несколько минут в ресторане; Достаточно сказать, что мы хорошо начали!

Моя жена ест мало — обычно заказывает две закуски вместо основного блюда, поэтому она выбрала Insalata Stella, в которой был салат со сливочным маслом, клюква, грецкие орехи, горгонзола и т. д. Она казалась очень довольна этим. За ней последовали Полента и Горгонзола Гратината; она обожала это блюдо, говоря, что она «ни за что» его не доест, но она сделала это на удивление.

Для целей этого отчета я хотел попробовать другой салат и был очень доволен Insalata di Bietole, восхитительным салатом из свеклы, который был богат горгонзолой, но красиво нарезанный винегретом из медовой горчицы. Мое фирменное блюдо — короткие ребрышки с полентой из маскарпоне — было выдающимся. Полностью «без кости» говядина, снова «нарезанная» гремолатой — комбинацией петрушки и лимонной цедры — чтобы сохранить насыщенность. Это действительно стоило высокой рекомендации нашего сервера.

Наш сопровождающий винный сервиз из кьянти и пино гриджо был одинаково отличным выбором, как и десерт! Временами тирамису может быть слишком насыщенным, но это было в самый раз: божьи пальчики, сливки и немного ликера сделали его поистине их «фирменным» десертом.

Вы знаете, будучи уроженцем города и видя мою долю итальянской кухни, у многих возникали предвзятые представления о том, что может предложить загородный итальянский ресторан, но «Stella Alpina Osteria» развеяла все это. Классная презентация, знающий, вежливый персонал и отличная еда, приготовленная богато, но ни в коем случае не «чрезмерно». Определенная «перемотка назад». Я рад, что у меня была возможность испытать это, поскольку я скоро снова это сделаю!

BMW Alpina XB7 2021 – WHEELS.ca

Я никогда не был пассажиром одного из тех причудливых частных самолетов, на которых обычно летают вокруг земного шара миллиардеры и мега-генеральные директора, но я думаю, что опыт похож на то, что вы найдете в BMW Alpina XB7. Поскольку ограничения на полеты и поездки все еще действуют, деловые поездки автомобильным транспортом стали намного более удобными и быстрыми.

Для тех, кто не знаком с названием, Alpina — это небольшая немецкая фирма, занимающаяся тюнингом автомобилей BMW с 70-х годов. Они тесно сотрудничают с BMW в разработке новых моделей и даже используют одни и те же производственные линии для создания своих автомобилей.

Основная философия Alpina отличается от философии M-дивизиона, собственной тюнинговой фирмы BMW. Вместо того, чтобы сосредоточиться на доблести на гоночной трассе и точной управляемости, Alpinas более классичны с шикарными интерьерами, мощными силовыми агрегатами и акцентом на комфорте езды, а не на рекордах Нюрбургринга.

XB7 — их последнее творение, основанное на самом большом внедорожнике BMW X7. С тремя рядами сидений, вмещающими до 7 человек, это, безусловно, самый большой продукт в портфолио Alpina.

Если массивные опциональные 23-дюймовые колеса Alpina с 20 спицами не подсказывают вам, что это не обычный X7, надпись «Alpina» на нижней половине переднего бампера и четыре хромированных овальных выхлопа чаевые обратно будут. К сожалению, покупатели из Северной Америки не имеют возможности добавить традиционную полоску, которая есть на многих моделях Alpina, продаваемых по всему миру.

Внутри это в основном стандартный тариф X7, хотя индивидуальная кожа BMW цвета слоновой кости и синего цвета, задрапированная на каждой поверхности интерьера, сама по себе роскошна. Отличия включают рулевое колесо Alpina с сине-зеленой строчкой, отделку из натурального орехового дерева Alpina и небольшое количество значков и гербов Alpina повсюду. Кластер цифровых датчиков имеет собственный шрифт и фирменный сине-зеленый фон с логотипом Alpina в центре на случай, если вам нужно напоминание о разреженных колесах, которыми вы управляли.

Все это очень приятно на ощупь и пахнет, но настоящие новости скрыты под капотом. Начиная с 4,4-литрового двигателя V8 с двойным турбонаддувом от X7 M50i, Alpina заменила турбины более крупными агрегатами, добавила два внешних водяных охладителя, увеличенный охладитель трансмиссионного масла и специальные промежуточные охладители Alpina. Они также добавили более свободную выхлопную систему Alpina из нержавеющей стали, которая также придает XB7 фирменный звук.

Результатом всего этого является 612 л.с. и 590 фунт-фут крутящего момента, приводящий в движение все четыре колеса.Прежде чем вы подумаете, что это просто еще один двигатель с ребрендингом с полки M, это не так. От реакции дроссельной заслонки до подачи мощности Alpina оставила свой собственный след и проделала большую работу, чтобы дистанцироваться от типичного продукта BMW.

8-ступенчатая автоматическая коробка передач ZF была модифицирована, чтобы справиться с дополнительным крутящим моментом, а карты переключения были перепрограммированы в соответствии с собственными спецификациями Alpina.

Они также изменили режимы вождения, полностью исключив режим Eco и оставив Comfort, Sport и Adpative.Как и в 7-й серии, здесь есть настройка Comfort Plus, благодаря которой кажется, что дорога под вами исчезает.

В режимах «Спорт» или «Спорт Плюс» звук из четырех трубок звучит проникновенно, издавая тяжелый басовый гул, который вы чувствуете своими костями.

Вождение XB7 доставляет незабываемые впечатления. Все настройки аппаратного и программного обеспечения создали нечто, что кажется сделанным на заказ. Мягкое рулевое колесо прекрасно лежит в руке, а XB7 ныряет в повороты с настойчивостью, с которой не может сравниться обычный X7. Подача мощности богата крутящим моментом и бездонна, но при этом маслянистая.

Пневматические рессоры на задней оси позволяют XB7 снизить дорожный просвет на 40 мм в режиме Sport Plus, а рулевое управление задними колесами делает этот большой автомобиль меньше, чем он есть на самом деле. На извилистых дорогах можно повеселиться, и это не часто говорят, когда говорят о чем-то настолько большом, что оно может генерировать собственное гравитационное притяжение.

В отличие от автомобилей BMW M, вы никогда не почувствуете себя в псевдогоночном автомобиле даже в самых спортивных условиях.Точно так же переключение передач никогда не бывает резким и происходит при нормальных оборотах двигателя, а не вблизи красной линии, если вы действительно не находитесь на ней.

Я могу только представить, насколько особенным был бы XB7 с полной кожаной отделкой салона Lavalina, доступной на других рынках. Пока вам придется довольствоваться вариантами из каталога BMW, а где-то вдалеке играет самая маленькая в мире скрипка.

Все это великолепие не обходится дешево, и с дополнительными функциями, такими как эпическая звуковая система Bower и Wilkins Diamond (5000 долларов США), тестируемая цена в 179 900 долларов США означает, что очень немногие смогут испытать такой великолепный внедорожник.

Однако, если у вас есть деньги, Alpina XB7 станет убежищем от повседневности. Это гранд-турер для семи человек в лучших традициях и наземный частный самолет для тех случаев, когда вам нужно сбежать от всего этого.

Автомобиль был предоставлен писателю автопроизводителем. Содержание и оценки транспортных средств не подлежали утверждению.

BMW Alpina B8 Gran Coupe 2022 года предлагает взрывную производительность и повышенный комфорт

Компания BMW только что сняла покровы со своего BMW Alpina B8 Gran Coupe 2022 года, который обещает продолжить традицию Alpina сочетать спортивные характеристики с повседневным комфортом и удобством.Красивое новое 4-дверное купе поступит в автосалоны BMW этой весной. Рекомендованная базовая розничная цена производителя составляет 139 900 долларов плюс плата за доставку в размере 995 долларов.

Под стройным капотом B8 Gran Coupe находится 612-сильный 4,4-литровый двигатель V8 с двойным турбонаддувом. С 590 фунт-фут. крутящего момента в диапазоне от 2000 до 5000 об/мин, двигатель V8 обещает отличные ходовые качества в различных ситуациях, от поездок в загородный клуб до использования на треке.

8-ступенчатая автоматическая трансмиссия автомобиля, сильно модифицированная производителем трансмиссий ZF, оснащена Alpina Switch-Tronic с несколькими режимами переключения передач.Разработанная для комфортного переключения передач в повседневном использовании, трансмиссия предлагает спортивный режим, обеспечивающий более четкие характеристики переключения передач, ориентированные на производительность. Также доступен ручной режим, обеспечивающий сверхбыстрое переключение передач вручную.

Чтобы трансмиссия прожила долгую и счастливую жизнь, в системе охлаждения используются три отдельных внешних радиатора охлаждающей жидкости, увеличенный радиатор трансмиссионного масла и промежуточные охладители Alpina с поверхностью охлаждения на 50 % больше, чем у BMW M850i ​​xDrive Gran Coupe.

Даже звук выхлопа получил особый оттенок Alpina. Выхлопная система из нержавеющей стали снижает противодавление, подчеркивая динамичность двигателя V8. Водитель B8 может изменить звук, выбрав режим «Комфорт» или «Спорт», который управляет активными заслонками системы выпуска.

Все эти настройки приводят к исключительной производительности. BMW заявляет, что BMW Alpina B8 Gran Coupe 2022 года может разгоняться с места до 60 миль в час всего за 3,3 секунды и преодолевать четверть мили с места всего за 11.5 секунд. Максимальная скорость заявлена ​​производителем на уровне 201 миль в час.

Спортивная подвеска BMW Alpina B8 обеспечивает исключительный комфорт и превосходный контроль на скорости. Одной из его наиболее привлекательных деталей является расположение задних колес. Система ZF Active Kinematics Control System позволяет задним колесам поворачиваться максимум на 2,3 градуса влево или вправо для дополнительной маневренности на низких скоростях и большей устойчивости, когда спидометр приближается к 320 км/ч.

Как принято в автомобилях Alpina Performance, изменения внешнего вида сопровождают улучшенную динамику B8 Gran Coupe.

Снаружи большие воздухозаборники являются одновременно функциональными и стильными. И это заявление продолжается в задней части автомобиля с массивным черным диффузором и слегка элегантным задним спойлером. Два цвета кузова — синий металлик и зеленый металлик — зарезервированы для моделей Alpina, таких как B8 Gran Coupe, но клиенты также могут покрасить автомобиль в самые разные цвета BMW.

Интерьер украшен деталями только для Alpina. Среди них рулевое колесо Alpina, обтянутое необработанной кожей Lavalina, селектор iDrive из хрусталя с логотипом Alpina и акценты из глянцевого орехового дерева антрацитового цвета.Обширный список стандартного оборудования включает кожаную обивку Merino, обшивку потолка антрацитовой алькантарой, подогрев и вентиляцию передних сидений, рулевое колесо с подогревом, панорамный стеклянный люк и аудиосистему Harman Kardon.

BMW является источником информации для этой статьи. Это было точно на 24 марта 2021 года, но с этой даты оно могло измениться.

Обзор: 2011 BMW Alpina B7

Alpina производит лучшее впечатление от M7

2011 BMW Alpina B7 — Щелкните выше для просмотра галереи изображений в высоком разрешении

Как ни старайся, BMW M3 Coupe не может потерять Альпина Б7.Мы вдвоем — необычная автомобильная пара, играющая в кошки-мышки на одной длинной дороге в никуда глубоко в пределах некорпоративной области прибрежных гор Калифорнии. Воздух прохладный, а каньоны в основном тихие. Только звук двух завывающих V8 нарушает тишину.

Пока M3 уверенно ныряет в повороты, B7 стартует со свирепой уверенностью. M3 энергично тянет на коротких прямых, но B7 решительно снижает мощность и неуклонно возвращает меньшее купе обратно.Даже в середине поворота, когда M3 находится в идеальном шаге, B7 сжимает немного более широкую линию, но все еще удерживает свои позиции.

Мы в этой игре уже больше часа, и ни один из нас не хочет поднимать белый флаг. Только подсветка индикатора низкого уровня топлива в купе меньшего размера заставила нас остановиться. Хотите узнать, что нужно, чтобы преследовать владельца M3?

Продолжить чтение…

Авторские права на фотографии © 2011 Michael Harley / AOL

Компания Alpina Burkard Bovensiepen GmbH («Alpina») со штаб-квартирой в Германии работает над моделей BMW с 1970-х годов, и хотя большинство считает Alpina послепродажный тюнинг, компания официально признана производителем автомобилей.С первых дней своего существования модели Alpina были известны своим двигателем заводского качества, подвеской и косметическими обновлениями, и компании приписывают предложение высокопроизводительных уличных вариантов. Модели BMW еще до того, как собственное подразделение автопроизводителя Motorsport «M» вступило в игру.

Тридцать пять лет спустя я сижу за рулем F01 B7 BiTurbo — последнего творения Alpina, основанного на нынешнем BMW Платформа 7 серии. Отражая различные варианты шасси и трансмиссии, предлагаемые BMW, Alpina B7 может быть со стандартной или длинной колесной базой, а также с задним или полным приводом (xDrive).Самый спортивный вариант из четырех — это модель с короткой колесной базой и задним приводом. Это будет модель Alpina Blue Metallic, которую мы тестируем.

Сердцем каждой модели Alpina является собранный вручную двигатель, а B7 оснащен сильно модифицированной версией BMW N63, полностью легкосплавного 4,4-литрового двигателя V8 с прямым впрыском и двойным турбонаддувом, который в настоящее время устанавливается на БМВ 750i. Мастерам на предприятии Alpina в Бухлоэ, Германия, поручено открыть его и выполнить сложную операцию, которая включает в себя множество обновлений и улучшений для всей трансмиссии.В блок вставлены высокопроизводительные поршни, а головки цилиндров усилены, чтобы выдерживать дополнительную нагрузку из-за более высокой степени сжатия. Более крупный промежуточный охладитель с увеличенной на 35 процентов площадью поверхности приспособлен для более низких температур на впуске. Дополнительный радиатор опускается температуры охлаждающей жидкости, а для моторного и трансмиссионного масла добавляются внешние охладители. Электрический вентилятор также модернизирован, чтобы увеличить поток воздуха благодаря новым высокопроизводительным компонентам. Чтобы пропустить через двигатель больше кислорода, установлены более крупные турбонагнетатели (диаметр лопастей 44 мм), обеспечивающие бесперебойную работу всего агрегата, а программное обеспечение управления двигателем Alpina увеличивает наддув до 14.5 фунтов на квадратный дюйм и перекалибрует как систему контроля устойчивости, так и контроль тяги с более агрессивными настройками.

В то время как N63 модели 750i развивает мощность 400 л. .

Мощность обеспечивает коробка передач Alpina Switch-Tronic (модифицированная шестиступенчатая автоматическая коробка передач ZF с мокрым охлаждением). Крошечные кожаные кнопки на задней части рулевого колеса позволяют вручную выбирать передачу (правая сторона «+» и левая сторона «-»), а трансмиссия, от карданного вала до дифференциала, также была усилена.

Архитектура подвески использует динамическое управление демпфированием BMW и активную стабилизацию поперечной устойчивости, которые используются в других моделях 7-й серии, но Alpina вряд ли оставит их в покое. Автопроизводитель увеличивает жесткость пружины на 20 процентов и снижает дорожный просвет примерно на полдюйма в целом. Из кабины водитель может выбрать одну из трех настроек подвески: Comfort, Normal и Sport. Режим Sport-Plus переводит систему динамического контроля устойчивости в более агрессивный режим динамического контроля тяги (DTC), что позволяет увеличить пробуксовку ведущих колес и уменьшить помехи от системы контроля тяги.

Массивный тормоза (полученные от более тяжелой бронированной модели 7-й серии «Protection») имеют диаметр 14,72 дюйма спереди и 14,57 дюйма сзади. Стандартные колеса представляют собой 21-дюймовые легкосплавные колеса, разработанные Alpina (стержень клапана находится в центре благодаря одной полой спице), с шинами 245/35ZR21 спереди и шинами 285/30ZR21 сзади (модели xDrive и длинной колесной базы с шинами 245/50ZR18 на всех четырех колесах). Снаряженная масса этой заднеприводной модели со стандартной колесной базой, по данным Alpina, составляет 4564 фунта, а выбор модели xDrive с длинной колесной базой приводит к увеличению снаряженной массы до 4861 фунта.Несмотря на это, распределение веса стандартного B7 довольно сбалансировано: 51,4: 48,6 спереди назад.

Внешний вид B7 отличается уникальными сдвоенными выхлопными трубами и специальными передним и задним нижними спойлерами. Alpina заявляет, что последние уменьшают подъемную силу на 30 процентов спереди и на 15 процентов сзади и улучшают устойчивость на высоких скоростях, не оказывая отрицательного влияния на коэффициент аэродинамического сопротивления. Мы говорим, что они выглядят слишком «пристегнутыми».

Интерьер Alpina B7 преображается.Салон оснащен спортивными сиденьями (обтянуты специальной кожей Alpina), новыми приборными панелями (красные стрелки на синем фоне), отделкой деревом «Мирт», Alpina. напольные коврики, фирменные дверные пороги с подсветкой и прошитый вручную руль Alpina с уникальными вышеупомянутыми кнопочными переключателями. Наконец, если кто-то каким-то образом пропустил все остальные маркировки, есть еще одна табличка Alpina, установленная на внутренней панели крыши прямо перед люком.

Помимо лишнего брендинга, кабина B7 — очень удобное место для длительного времяпрепровождения (вспомните BMW 7 серии, но с дополнительной роскошью и удобствами).Трудно придраться к комфорту сиденья, поддержке, посадке водителя или общему внешнему виду.

При нажатии на кнопку запуска двигатель прокручивается и переходит на приглушенный холостой ход, хотя, как ни удивительно, в звуке выхлопа нет ничего примечательного. Как и все седаны 7-й серии, B7 кажется большим. Резервное копирование осуществляется с помощью электронных средств, а смена полосы движения требует преднамеренного взгляда через плечо, а затем повторного взгляда в зеркало. В то время как он вполне компетентен в условиях мегаполиса, полноразмерный седан просто чувствует себя немного неуместно, лениво плетясь по бульвару.

Хотите разбудить спящего великана? Нажмите педаль акселератора в пол.

Передутый 4,4-литровый двигатель Alpina оживает, как курсант, вскакивающий с постели по зову сержанта-инструктора. Любые мысли о турбо-задержке отбрасываются на задний план (и забываются), когда B7 взлетает. Да, он большой и тяжелый, но он властно выходит из-под контроля. BMW заявляет, что разгон до 100 км/ч занимает 4,5 секунды, но кажется, что это быстрее (ради улыбки, мы подключили B7 к довольно простому Escort G-Timer GT2 и записали легкую 4.32 секунды). Как любители грубой силы, мы рады заявить, что этот седан Alpina бьет по всем нервам. Как Nissan GT-R, B7 просто просится покрасоваться на светофоре.

Поместите B7 на открытое шоссе, и тротуар спокойно катится под его шасси миля за милей. Тем не менее, сложно нащупать еще один пятиместный полноразмерный роскошным седаном, который так же хорошо справляется с шоссе на забавных двухполосных дорогах.

Десятилетний опыт совместной работы Alpina с BMW принес свои плоды.Настройка подвески почти идеальна, с очень небольшим креном кузова и почти безошибочным демпфированием на большинстве дорожных покрытий. Изменения направления происходят быстро и плавно, с отличной обратной связью через рулевое колесо. В то время как нам не нравились крошечные «кнопки» переключения передач на задней части рулевого колеса (почти бесполезные в пылу битвы), шестиступенчатый автомат был компетентен, когда автомобиль был переведен в режим «Спорт-Плюс». если подумать, B7 действительно мог бы использовать одну из этих хитрых кнопок «M» для персонализации параметров производительности.

Alpina B7 — потрясающая машина. Вопреки всякой логике, седан, кажется, теряет вес по мере увеличения перегрузки — сверхъестественная обратная связь с водительского места спортивный автомобиль, завернутый в легкую маскировку 7-й серии из папье-маше. Одним словом: весело.

Хорошей новостью является то, что Alpina B7 получает золотую корону с меховой подкладкой как нынешний высокопроизводительный король больших седанов BMW. А с Е60 M5 снят с производства и F10 До M5 еще несколько месяцев, и он должен согреться до наступления лета. Не забывайте, что с базовой ценой всего в 122 000 долларов B7 также удобно обходит двенадцатицилиндровый твин-турбо 760Li за 137 000 долларов.

Плохая новость для Alpina B7, конечно, в том, что соперник Mercedes-Benz только что обновил двигатель в своем высокопроизводительном автомобиле стоимостью 138 000 долларов. С63 АМГ. Исчез безнаддувный 6,3-литровый V8 мощностью 507 лошадиных сил. На его место пришел новый 5,5-литровый V8 с двойным турбонаддувом, мощностью 536 лошадиных сил и 590 фунт-фут крутящего момента (выберите пакет Performance за 7300 долларов, и эти цифры возрастут до 563 лошадиных сил и 664 фунт-фут крутящего момента).Что касается силовых установок, новый S63 Двигатель AMG примерно так же хорош, как и они, но Общий пакет производительности S-класса по-прежнему не дотягивает до B7. Иными словами, никто не участвует в гонках на S63, но более чем горстка владельцев Alpina часто посещает трассу — вряд ли это вызовет смех в галерее арахиса.

Купе M3 лучше спортивного автомобиля, но в этот конкретный день и на этой конкретной дороге другой водитель никогда не сможет это доказать. Каждый раз, когда он стреляет в угол, мы отходим на 20 ярдов назад.Он открывает разрыв на каждом апексе, но мы сильно нажимаем на газ, чтобы закрыть его после каждого выхода. Он просто не может победить.

Если и есть какое-то утешение для владельца M3, так это тот факт, что Alpina будет собирать только около тысячи спортивных седанов 7-й серии в год. Менее половины из них прибудут в Штаты. Это должно быть утешением для той особой породы водителей спортивных купе, поскольку они редко когда-либо увидят Alpina B7, не говоря уже о том, чтобы быть запуганными одним на пустынной дороге каньона.

Молекулярная характеристика и генетическое разнообразие…

Введение

Пищевые масла, продуцируемые маслянистыми микроорганизмами, называются одноклеточными маслами (SCO). Большинство этих микроорганизмов, накапливающих масло, представляют собой виды дрожжей и грибов. Всесторонний анализ молекулярной филогении ядерной рибосомной дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) показал, что отряд Mortierellales содержит около 100 описанных видов, а семейство Mortierellaceae включает около 13 родов. M. alpina является одним из основных видов, производящих масло из одиночных клеток/продуцирующих арахидоновую кислоту в промышленных масштабах под видом Mortierella . (Coemans 1863; Hibbett et al. 2007; Hoffman et al. 2013; Spatafora et al. 2016; Wagner et al. 2013). Ван и др. (2011) описали реконструированную в масштабе генома метаболическую модель M. alpina для более высокого производства арахидоновой кислоты в промышленных масштабах. Ученые находятся в постоянном поиске новых видов/новых штаммов и изо всех сил пытаются взломать код реконструкции генома, чтобы использовать эти виды, чтобы производство арахидоновой кислоты можно было упростить и коммерциализировать с помощью улучшенного протокола (Shin et al.1994 год; Ри и ​​др. 2002 г.; Ри и ​​Парк, 2001 г .; Ха и др. 2004).

Маслянистые грибы, особенно виды Mortierella , являются повсеместными, сапрофитными и относятся к классу зигомицетов. Потенциал производства полиненасыщенных жирных кислот (ПНЖК) делает эти грибы уникальными и важными для нефтедобывающей промышленности. Современная таксономическая классификация, основанная на внутренней расшифровке спейсеров (Kirk 1997; Linnemann 1941; Degawa and Gams 2004; Ariyawansa et al. 2015), классифицирует род Mortierella на семь групп: селеноспора и парвиспора», «мутовчатая гумилис», «лигникола», «mutabillis, globulifera и angusta», «strangulate и wolfii», «alpina и polycephala» и «gamsii».

В ходе наших исследований ливийских мортьерелловых грибов мы выделили множество разнообразных видов. Удивительно, но четыре вида Mortierella , с которыми мы столкнулись в Ливии, до сих пор не зарегистрированы. Насколько нам известно, это первое сообщение об этих масличных грибах из этой страны.

Методы

Сбор образцов почвы и выделение грибов

Это исследование было проведено в декабре 2017 года. Всего в четырех разных местах , а именно. Marawah, Albayda, Faydiyah и Suluntah, расположенные в районе Aljabal Al-Akhdar, на северо-востоке Ливии, были выбраны, как показано в Таблице 1. В общей сложности 10 г образца ризосферной почвы из каждого места были собраны в стерилизованные полиэтиленовые пакеты и доставлены в микробиологический отдел. лаборатории Университета управления и науки, Шах-Алам, Малайзия, и хранили при температуре 4°C для дальнейшей обработки.

Таблица 1. Описание пунктов сбора географических координат в Аль-Джебель-Алакдаре (северо-восток Ливии).

9234 68

Местонахождение	Количество проб	Дата сбора	Места сбора	Температура в месяцы сбора (°C)		Среднегодовая температура осадков (04C) 920 )	среднегодовая относительная влажность (%)	Географическое распределение (координаты)	Высота (M)
				декабря (Min-Max)	января (Min-Max)
AL -Джебель-Алакдар (северо-восток Ливии)	Образец 1	13. 12.2017	Marawah	7.0-15.6	7.0-15.6	4.9-13.4	16.4	256	32 ° 28’59 «N 21 ° 24’15» E	464
	Образец 2	16.12.2017	6.1-14.5	6.1-14.5	6.1-14.5	4. 0-11.8	15.3	540	67	32 ° 35’59 «N 21 ° 34’30» E	624
	Образец 3	16.12.2017	Файдия	5.0-13.5	2.9-11.0	2.9-11.0	14.2	405	405	68	32 ° 41’26 «N 21 ° 54’27» E	774
	образец 4	16. 12.2017	Сутунтая	5.1-13.6	3.1-11.3	14.4	408	408	69	69	35 ° 35’25 «N 21 ° 32’57» E	754

Грибная изоляция была проведена традиционная методика серийных разведений, при которой 1 г почвы смешивали с 9 мл стерильной дистиллированной воды и встряхивали в течение 15 мин при 25°С; были сделаны серийные разведения от 10 ^-1 до 10 ^-4 . Аликвоту по 0,1 мл из каждого разведения переносили на картофельно-декстрозный агар с добавлением 100 мкг хлорамфеникола/мл антибиотика и инкубировали при 25°С в течение 3–7 сут.

Морфологическая идентификация

Морфологические признаки гриба наблюдались на среде с картофельно-декстрозным агаром (PDA) после одноточечной инокуляции в чашки Петри диаметром 9 см и инкубации при 25°C в течение 5-7 дней (Hyde et al. 2016) . Образцы инокулировали с помощью стерилизованной инокуляционной иглы путем инокуляции центральной точки на среду PDA, содержащую чашки Петри.Все методы выполнялись при ламинарном воздушном потоке с соблюдением всех асептических условий, чтобы избежать любого вида загрязнения, с использованием стандартного протокола, описанного Lee et al. (2017). Чашки Петри запечатывали парапленкой и инкубировали в течение 5-7 дней при 25°С в темноте для роста новых видов грибов. Все четыре отдельных изолированных вида грибов содержались в пластиковых чашках Петри (диаметром 9 см). Эти пластины наблюдались ежедневно, и их морфологические характеристики , а именно. Регистрировали внешний вид колоний , пигментацию, характер роста, цвет колоний (спереди и сзади), диаметр колоний.Отдельные колонии грибов с разной морфологией были отобраны и идентифицированы с помощью версии mycokeys 3.0. Морфологические признаки четырех изолятов грибов сопоставлены с известными монографиями именно II подрода: Mortierella ; 2. Секция ALPINA Linnem. Мукоринин-Гатт. Mortierella : 35. Монография 1941 г. (Gams 1977) для оценки новизны, как показано в Таблице 2. ^и .

w3.org/2001/XMLSchema-instance» frame=»void»>

Характеристики	MSU-101 (№ MZ298831)	MSU-201 (№ MZ298832)	MSU-401 (№ MZ298834)	MSU-501 (№ MZ298835)	Морттерелла alpina a M136 (ATCC 32222; CBS 528.72)
Колония	Быстро растет при 25°C на КПК, беловатого цвета; обратная окраска колонии светло-желтовато-белая с небольшим зональным рисунком	Быстро растет при 25°C на КПК, Слегка хлопчатобумажная в центре с белым краем; обратная окраска колонии желтовато-белая с умеренно зонным рисунком	Быстро растет при 25°C на КПК, хлопчатобумажный в центре с белым краем; обратная окраска колонии слегка желтовато-белая с неравномерно зонным рисунком	Быстро растет при 25°C на КПК, Хлопковидный рост в центре с беловатым краем; обратная окраска колонии темно-желтовато-белая с перекрытием нечеткий зональный рисунок	Паутинистая до хлопковидной Белая, паутинистая до хлопчатобумажной
Спорангиофоры	Умеренно разветвленные, 2-3. 5 мкм в ширину на конце с переменной длиной, до 245 (-370) мкм в длину	В основном разветвленные, 3-3,5 (-2) мкм в ширину на конце с переменной длиной, до 250 (-400) мкм в длину	В основном разветвленные, 3,3-3,8 (-2) мкм в ширину на кончике с переменной длиной, до 250 (-390) мкм в длину	В основном разветвленные, 3,3-3,8 (-2) мкм в конце на конце с переменной длиной, до 250 (-400) мкм длинные	1,5-3,5 мкм шириной на конце с переменной длиной, 5-8 (-12), до 250 (-400) мкм длиной
Спорангии	Шаровидные, многоспоровые, 16.5–33,5 × 18–32 мкм	Шаровидные, множество спор, 16–32 × 19–32 мкм	Шаровидные, несколько спор, 14–33,5 × 18–32 мкм	Шаровидные, несколько спор, 16,5– 33,5 × 18–32 мкм	Шаровидные, (15−) 20–30 мкм
Спорангиоспоры	Овальные, гладкие, гиалиновые 8–15,5 × 5–8,5 мкм 5 × гладкие , 7. 4, 4.4, 4,474 яйцевидные	-8,3 мкм	Яйцевидная, гладкая, гиалиновая 7–14,5 × 5–8,5 мкм	Яйцевидная, гладкая, гиалиновая 7,5–15,5 × 5–8,5 мкм	Яйцевидная, гладкая, гиалиновая 5–11 × 5–9.5 мкМ
Chlamydospores Zygospores	Zygospores	Zured Не наблюдается	Настоящее Не наблюдалось	Настоящее Не наблюдалось	Настоящее Не наблюдалось	Настоящее Глобас до подпункта, (42-) 55 (- 80) × (40–)52(–70) мкм

Прямая микроскопическая идентификация была выполнена с использованием дистиллированной воды (метод влажного монтирования), при которой чистое предметное стекло было помечено в средней части маркером и каплей стерилизованной дистиллированной воды наносили на отмеченную среднюю часть, воздушные споры и вегетативные гифы грибного изолята брали с помощью стерилизованной инокуляционной иглы и равномерно распределяли в капле воды. Затем на препарат осторожно наносили покровное стекло таким образом, чтобы не образовывалось пузырьков воздуха. Та же процедура была применена с раствором лактофенола для идентификации различимых структур, и подготовленные слайды были исследованы под световым микроскопом при 40-кратном увеличении (модель: SZX16 Olympus, Япония). Были измерены и задокументированы спорангиофор, спорангий и спорангиоспоры, форма и размер, модель развития, зрелые и незрелые спорангиоспоры, интеркалярные хламидоспоры (White et al.1990). Чистые культуры четырех грибковых изолятов сохраняли и поддерживали (полностью выращенные грибковые культуры со штрих-кодом после 5 дней инкубации при 25°C) в скошенных пробирках PDA и хранили в 20% глицерине при –80°C в холодильной камере микробиологической лаборатории университета. Позже все четыре культуры были закодированы как MSU-101, MSU-201, MSU-401 и MSU-501 и депонированы в Центре сбора культур МГУ, Университет управления и науки, Шах-Алам, Селангор, Малайзия.

Экстракция геномной ДНК и выравнивание последовательностей

Суммарную геномную ДНК (гДНК) экстрагировали в соответствии со стандартизированным протоколом (Tamura et al. 2013). Консервативные области ITS и рДНК амплифицировали с использованием ITS4 (5′-GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG-3′) и ITS1 (5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′)

Полную геномную ДНК (гДНК) экстрагировали непосредственно из мицелия изолятов грибов с использованием геномной ДНК ремонтный комплект (KIT-1200-50: набор для штрих-кодирования ДНК грибов, Apical Scientific Sdn Bhd Malaysia, в соответствии с инструкциями производителя). Пошаговый протокол выделения геномной ДНК включает 1. 500 мкл буфера для лизиса грибов, добавленного в микроцентрифужную пробирку объемом 1,5 мл, содержащую 1 см агарового куба чистой культуры грибов.2. Добавлено 3 мкл раствора протеиназы К. Vortex для смешивания и вращения на короткое время. 3. Пробирки инкубировали при 56°С в течение ночи и центрифугировали лизат при 14000-16000×g в течение 10 минут. 4. Перенесли ~500 мкл супернатанта в новую микроцентрифужную пробирку объемом 1,5 мл, содержащую 500 мкл изопропанола. Пробирку несколько раз переворачивали для осторожного перемешивания. 6. Центрифугировали при 14 000–16 000×g в течение 10 мин и отбрасывали надосадочную жидкость. 7. Добавляли 1 мл 70% этанола, снова центрифугировали при 14 000–16 000×g в течение 5 минут и отбрасывали надосадочную жидкость.8. Поддон сушили на воздухе в течение 3 минут, ресуспендировали с 50 мкл буфера TE и инкубировали при 56°C в течение < 1 часа. 9. Оптическую плотность (ОП) измеряли с помощью спектрофотометра (Thermo Scientific, США), нуклеиновую кислоту разводили до концентрации от 15 до 25 нг/мкл, а 2 мкл разбавленной нуклеиновой кислоты использовали в качестве ДНК-матрицы для ПЦР. 10. Смесь для ПЦР готовили в соответствии с инструкциями производителя и добавляли 2 мкл матрицы ДНК с каждыми 23 мкл смеси для ПЦР в пробирку объемом 0,2 мл или в 96-луночный планшет. 11. Протокол цикла ПЦР запускали на термоциклере, продукты ПЦР ~700 п.н. проверяли на 1% агарозном геле (First Base NGS KIT, Малайзия) и секвенировали с помощью секвенатора ABI3100.12. После того, как результаты секвенирования были готовы, чтения были обрезаны со значением качества (QV) < 20, после чего результаты прямого и обратного секвенирования были сопоставлены. 13. Полученные последовательности сравнивали с ранее представленной базой данных NCBI с использованием алгоритма BLAST (Kimura 1980) для проверки процента идентичности, соответствующего анализируемому виду (таблица 2). 13. Последовательности грибов были выровнены с использованием Clustal_X v.2.1, а филогенетическое дерево на основе объединения соседей было построено с использованием программного обеспечения Mega (молекулярно-эволюционный генетический анализ) X версии 16.04.4 (с Unity Desktop, режим ANALYZE; Tamura et al. 2013), чтобы наблюдать группировку полученных последовательностей новых видов грибов (Kimura 1980; Nagy et al. 2011; Chien et al. 1974).

Результаты и обсуждение

Морфологическое подтверждение

На основании морфологических и культуральных признаков подтверждена принадлежность изолятов грибов к роду Mortierella . Колонии изолятов маслянистых грибов после семи дней инкубации при 25°C на PDA спорообразовывались, быстро росли, образовывали концентрический рисунок, имели радиальный рост в форме цветка и имели цвет от желтоватого до беловатого, как показано на рисунке 1 (Eltariki, Тивари и Алхут, 2021 г. ).Подробные описания морфологических характеристик, таких как спорангиофоры, спорангии, спорангиоспоры, со ссылкой на изолят M. alpina (ATCC 32222; CBS 528.72) приведены в таблице 3 и на рисунке 2. Отличительные признаки между четырьмя изолятами грибов (со штрих-кодом MSU-101). , MSU-201, MSU-401 и MSU-501) характер роста, края и цвет колонии на среде PDA спереди и сзади, как показано на рисунке 1, что требует дальнейшего изучения. Таким образом, эти четыре новых изолята были исследованы на молекулярную характеристику и генетическое разнообразие.

Рисунок 1. Колонии изолятов грибов на среде с картофельно-декстрозным агаром (PDA) (вид спереди и сзади) после 7 дней инкубации при 25°C.

(A) Колонии МСУ-101 на КПК, вид спереди и сзади. (B) Колонии MSU-201 на КПК спереди и сзади. (C) Колонии MSU-401 на КПК спереди и сзади. (D) Колонии MSU-501 на КПК спереди и сзади.

Рис. 2.

(A) Мейоспора изолята MSU-101. (B) Незрелые спорангии разветвленного спорангиофора MSU-101. (C) Интеркалярная хламидоспора изолята MSU-101.(D) Гиалиновые и яйцевидные спорангии, изолят MSU-201. (E) Развитие спорангиев на одном спорангиофоре, изолят MSU-201. (F) Незрелый молодой спорангий на сильно разветвленном спорангиофоре, MSU-201. (G) Незрелый молодой спорангий на сильно разветвленном спорангиофоре, MSU-401. (H) Зрелый шаровидный спорангий, содержащий спорангиоспоры, MSU-401. (I) Терминальные хламидоспоры с сосочковой орнаментацией и сегментом гиф, оставшимся на дистальном конце, MSU-501. (J) Сеть гиф с разветвлением и перегородкой, MSU-501.(K) Сеть гиф с разветвлением и хламидоспорой, MSU-501. (L) Развивающийся спорангий на кончике спорангиофора, MSU-501.

Таблица 3. Регистрационные номера GenBank, использованные для филогенетического анализа в настоящем исследовании.

MZ298831325 7 4 FN34 MZ298835 образец4

Расположение	Тип образца	Штрих изолята	инвентарный номер	Процент (%) сходства по Clustal_X
Австрия	Environmental образец	некультурных Mortierella Clone IIS1 -5		EU517021 100
Marawah, Северо-Восток Ливия	образец почвы	Mortierella Альпина Штамм МГУ-101		100
Китай	образец почвы	Mortierella Альпина штамма QLF48	FJ025186	100
Арагон, Испания	известковые почвы и Клубень Melanosporum эктомикоризных в средиземноморской зоне	Mortierella Альпина изолят MM3	KX343169 9 0060	99. 83
Suluntah, Северо-Восточная Ливия	образец почвы	Mortierella Альпина штамма MSU-401	MZ298834	100
Tongshan: Новый район, Сюйчжоу, Цзянсу, Китай	(эндофитного грибы) Семя образец	Mortierella Альпина штамма xsd08339	EU
99,83
Тяньшуй Ланьчжоу, Ганьсу, Китай	Эндофитные грибы из ризосферы почв и корни Lycium barbarum л.	Mortierella Альпина штамм GFRS11		MT447479 99.67
Тяньшуй Ланьчжоу, Ганьсу, Китай	Эндофитные грибы из ризосферы почв и корни дереза ​​обыкновенная	Л. Mortierella Альпина штамма QLF60	FJ025143	99.67
Тяньшуй Ланьчжоу, Ганьсу, Китай	Эндофитные грибы из ризосферных почв и корней Lycium barbarum L.	Mortierella Альпина штамма QLF70	FJ025182	99,83
Mainz, Германия	почва Образец	Mortierella Альпина изолят A03ID2	KJ469805	98,85
Вагенинген, Нидерланды	Лиофилизированных споровый материал из Центра грибкового биоразнообразия CBS-KNAW в Утрехте, Нидерланды.	Mortierella alpina изолят d27	GQ 6	98.85
Ланьчжоу, Ганьсу, Китай	Эндофитные грибы из ризосферы почв и корни дереза ​​обыкновенная L.	Mortierella Альпина штамм QLF27		FJ025187 99,5
Циндао, Китай	Образец почвы из Антарктиды	Mortierella sp. Штамм HSX2 # -13	MT367225
98. 84
Асахикава, Хоккайдо, Япония	Образцы	Образцы из Уокера Ледник, Канадская высокая Арктика	Mortierella Alpina GR8-3-20-201999974 LC515164	99.5
Лариса, Греция	микробного сообщества из ризосферы образца почвы	некультурных zygomycete клон 1B6	FN689671	100
Ланьчжоу, Ганьсу, Китай	Эндофитные грибы из ризосферы почвы и корни Lycium barbarum L.	Mortierellales sp. штамм GFRS01	MT447469	99,84
Турин, ИТАЛИЯ	Образец из окружающей среды	Некультивируемый клон гриба 62
Albayda, Северо-Восточная Ливия	Почва Образец	Mortierella Альпина штамма MSU-501		100
Faydiyah, Северо- Восточная Ливия	Почва образец	Mortierella Альпина штамма MSU-201	MZ298832	100
Ланьчжоу, Ганьсу, Китай	почвы от альпийских лугов в восточной Qilian горы	Mortierellales sp. QLF86	FJ025158	100
Лариса, Греция	микробного сообщества из ризосферы образца почвы	некультурных Mortierellales клона 2B12	FN689675	100
Хайдянь, Пекин, Китай	почвы Образец	Mortierella Альпина штамм XY01520	MT521795	100
Berlin, Germany	Fine в воздухе частицы / споры, пробы окружающей среды	Mortierella Альпина изолят DSM100289_DF19_RLCS11	MT453274	100
Gronostajowa 7, Краков, Малопольша, Польша	Образец почвы ризосферы Симбиотические микробы Saxifraga stellaris sp. alpigena из медного ручья Шварцванда (Австрийские Альпы)	Mortierella sp. изолят MMS	MF565377	100
Севилья, Испания	Environmental образец	некультурных Mortierella клон IB2_K7	FN812729	100
Viale Маттиоли, Италия	Environmental образец	некультурных клон гриб iO03_P_2_B12	FN397316	100
Anning District, Ланьчжоу, Ганьсу, Китай	Образец почвы с альпийских лугов в восточных горах Цилянь 65 sples. tier	4	4QLF84	FJ025170	100
Viale Маттиоли, Италия	Environmental образец	некультурных гриб клон iE12_P_2_D7	FN397313	99,84
Инсбрук, Тироль, Австрия	Environmental образец	некультурных Mortierellaceae клон IIS4-1	EU517031	100
Виале Маттиоли, Италия	Образец из окружающей среды	Некультивируемый клон гриба 58	FN3
Район Аньнин, Ланьчжоу, Ганьсу, Китай	Образец почвы с альпийских пастбищ в восточных горах Цилянь	Mortierellales sp. QLF15	FJ025162	FJ025162	100
Viale Mattioli, Италия	Образец окружающей среды	Ту некультурный грибковый клон 50	FN397151	100
AV. Монтанана, Сарагоса, Испания	Разнообразие грибов, выделенных из известняка Образец почвы и Tuber melanosporum	Изолят Mortierella alpina 20PDA-D30	KX343151 0 9. 84
Halle / Saale, Германия	Образец окружающей среды	Ту некультурный клон Mortierella 09S50C12 (MOTU44)	HG936566	100936566	100
100

Молекулярная характеристика и генетическое разнообразие

в ее последовательностях анализ на основе Blastn ( Basic Local Alignment Search Tool for нуклеотиды), изоляты MSU-101, MSU-201, MSU-401 и MSU-501 относились к порядку Mortierellales , как показано на рисунках 3 и 4, что соответствует морфологической идентификации изолятов, как описано выше.Эти четыре грибковых изолята (со штрих-кодом MSU-101, MSU-201, MSU-401 и MSU-501) сравнивали и сравнивали с ранее представленными последовательностями близкородственных видов путем множественного выравнивания последовательностей (формат FASTA) с помощью программного обеспечения Clustal_X v. 2.1. Филогенетическое дерево, построенное с помощью режима объединения соседей с 1000 значений начальной загрузки, показало, что четыре изолята масличных грибов были на 100% сходны с более ранними последовательностями геномов M. alpina , представленными в GenBank NCBI (наиболее близкие совпадающие номера доступа GenBank: EU3; KX343169; FJ025186; FN689671; FN3; FJ025158), как показано в таблице 2 и на рисунках 3 и 4.Таким образом, эти изоляты были идентифицированы как вида M. alpina . Последовательности ITS этих грибковых изолятов были депонированы в GenBank под регистрационным номером MZ298831:MZ298835.

Рис. 3. Филогенетическое древо, основанное на методе присоединения к соседям из внутренних транскрибированных спейсер-консервативных последовательностей изолятов MSU-101 и MSU-401.

В узлах указаны значения поддержки Bootstrap.

Рис. 4. Филогенетическое древо, основанное на методе присоединения к соседям из внутренних транскрибированных спейсер-консервативных последовательностей изолятов MSU-201 и MSU-501.

В узлах указаны значения поддержки Bootstrap.

Настоящее исследование дополнено эталонными коллекциями штаммов грибов Mortierella alpina и описывает разнообразие этих штаммов с известными на сегодняшний день штаммами, как показано на рисунках 1 и 2. Эти новые изоляты Mortierella дополняют большой вклад грибов. разнообразие коллекций по всему миру, но все же есть много места для более полных коллекций M. alpina из Ливии, и это ограничение настоящего исследования.Таким образом, в будущем необходимо провести дальнейшую исследовательскую работу, чтобы можно было использовать скрытое разнообразие грибов Mortierella и их производственный потенциал SCO.

Chen и Ho (2008) сообщили о значении внутренней транскрибируемой спейсерной области (рибосомный ген 18S-28S) для генетической характеристики этих штаммов и обнаружили, что 5,8-области рДНК изолятов M. alpina были консервативными, за исключением некоторых идентифицированных полиморфных места. Кроме того, была сделана интерпретация того, что вариабельность присутствует в областях ITS1 и ITS2, так как полиморфный сайт отсутствует в 5.8 область рДНК. Таким образом, было очевидно, что область ITS можно использовать для уверенного различения M. alpina и других близкородственных видов. Эти исследователи также подчеркнули, что анализ дерева NJ (Neighbour-Joining philogenetic tree) обеспечивает точное генетическое разнообразие между штаммами M. alpina , что дает важную интерпретацию и выводы.

Многие виды Mortierella являются потенциальными производителями С18 и С20 ПНЖК (полиненасыщенных жирных кислот), таких как γ-линоленовая кислота и арахидоновая кислота. Вид M. alpina довольно известен производством одноклеточных масел, как описывают и сообщают несколько ученых время от времени (Chien et al. 1974; Huang et al. 2013; Tamayo-Velez and Osorio 2018; Osorio and Habte 2014). ; Эллегаард и др., 2013 г.; Ли и др., 2015 г.; Нгуен и Ли, 2016 г.; Хван и др. , 2005 г.; Шин и др., 2005 г.; Тивари и Разип, 2020 г.; Тивари и Ганесен, 2020 г.; Майтиг и др., 2028 г.; Хан и др. 2018; Асдрен и Файзал, 2018; Ю и др., 2019; Алхут и др., 2019; Тивари и др., 2018, 2019a,b).

Ученые-исследователи работают над модификацией этих новых штаммов, чтобы можно было увеличить производство SCO в промышленных масштабах. Shimizu and Sakuradani (2009) сообщили о штаммах M. alpina 1S-4, полученных путем всестороннего скрининга, для крупномасштабного производства различных ПНЖК. Этот изолят не только имел потенциал для производства SCO, но также имел несколько преимуществ для работы в качестве модели для исследований липогенеза. Таким образом, из ранее опубликованных данных мы можем ожидать, что изоляты, о которых сообщалось в настоящем исследовании, могут быть полезны для биоразведки с точки зрения производства нефти из отдельных клеток.Тем не менее, потенциал нефтеобразования этих изолятов маслянистых грибов находится в стадии изучения, и наша исследовательская группа в настоящее время работает в этом направлении, чтобы оценить потенциал SCO этих разнообразных изолятов, полученных из ливийской почвы.

Заключение

В настоящем исследовании четыре изолята маслянистых грибов со штрих-кодом MSU-101, MSU-201, MSU-401 и MSU-501 были идентифицированы и подтверждены морфологическим и молекулярным анализом. Эти грибковые изоляты продемонстрировали наибольшее сходство с видами Mortierella alpina и могут быть потенциальными производителями одноклеточного масла. Ведутся дальнейшие исследования для оценки и использования этих изолятов с точки зрения производства масла.

Доступность данных

NCBI GenBank: номера доступа от MZ298831 до MZ298835.

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/?term=MZ298831:MZ298835[accn].

Zenodo: Молекулярная характеристика и генетическое разнообразие четырех неописанных новых масличных штаммов Mortierella alpina из Ливии. https://doi.org/10.5281/zenodo.5239888 (Эльтарики, Тивари и Алхут, 2021 г.).

Этот проект содержит следующие исходные данные:

• — Развитие спорангиев на одном спорангиофоре, изолят MSU-201. JPG

• — Разработка спорангиума на совет на SporangiOShore, MSU-501.jpg

• — Hyaline и Ovoid Sporangia, MSU-201 ISOLATE.jpg

• — Незрелая спорангия от разветвленного спорангиофора MSU-101.jpg

• — Незрелые молодые спорангии на очень разветвленном спорангиофор, MSU-201.jpg

• — незрелая молодая спорангия на высокой разветвленном спорангиофор, MSU-401.jpg

• — интеркаларный хламидоспорство от изолята MSU-101.JPG

• — Meispore of Msu-101 isolate.jpg

• — Mortierell Alpina (4 штаммами) GEL Image.jpg

• — Mortierella Alpina Новой штаммы-MSU-201_FRONT View.jpg

• — Mortierella Alpina Normation Trame_Msu-101.jpg

• — Mortierella Alpina Nomain Name_Msu-101_bine View.jpg
  — Mortierella Note.jpg

• — Mortierella Alpina Note Firm_msu-401_Back. JPG

• — Mortierella ALPINA NANTER NAMET_MSU-401_FRONT REMICE_MSU-501_ REMPINA NOMETRE_MSU-501_BABLE View.jpg

  — Mortierella ALPINA NOME DIMING_MSU-501_FRONT View.jpg

• — Сеть гипы с разветвлением и хламидос МСУ-501.jpg

• — Сетка гиф с разветвлением и перегородкой, МСУ-501.jpg

• — Филогенетическое дерево МСУ-101 и МСУ-401.jpg

• _М — Филогенетическое дерево -501.jpg

• — Терминальные хламидоспоры с сосочковой орнаментацией и сегментом гиф, оставшимся на дистальном конце, MSU-501.jpg

• — Терминальные хламидоспоры.jpg

Данные доступны на условиях Creative Commons 4 Attributions. Международная лицензия (CC-BY 4.0).

Благодарности

Авторы хотели бы поблагодарить Университет управления и науки (MSU), Малайзия, за исследовательскую лабораторию. Лабораторная исследовательская работа была проведена мисс Фузией Эльфитури Муфтах Эльтарики из Ливии для защиты докторской диссертации. Степень D. под руководством доктора Мохаммеда Абдельфата Алхута и доктора Картикеи Тивари. Все авторы дали согласие на признание. Более раннюю версию этой статьи можно найти на Research Square (DOI: https://doi.org/10.21203/rs.3.rs-673772/v1).

Ссылки

• Алхут М.А., Эльтраики МЭФ, Ридзуан П.М., и др. : Ингибирующее действие экстрактов листьев Mentha piperita на продуцент микотоксинов Aspergillus niger. Междунар.Дж. Мед. Токс. Юридическая Мед. 2019; 22 (1-2): 179–183.
• Арияванса Х.А., Хайд К.Д., Джаясири С.К.: Заметки о разнообразии грибов 111–252 – таксономический и филогенетический вклад в таксоны грибов. Грибные водолазы. 2015; 75 : 27–274. Полный текст издателя
• Асдрен З., Файзал М.З.: Исследование потенциальной антибактериальной активности Salvadora persica в сочетании с Mentha arvensis против Staphylococcus spp.2018; 21 (3-4): 288–292.
•  Cien CY, Kuhlman EG, Gams W: Зигоспоры у двух видов Mortierella со «стилоспорами». Мико. 1974; 66 : 114–121.
•  Coemans E: Quelques hyphomycetes nouveaux. – Раздражение. – I. Mortierella polycephala et II. Мартенселла гребенчатая. Bull l’Acad Royale Sci, Lett, Beaux-Arts Belgique. Сер. 2. 1863; 15 : 536–544.
•  Degawa Y, Gams W: новый вид Mortierella и связанный с ним спорангионосительный микопаразит нового рода. Конный завод Нотадельфия. Мико. 2004; 50 : 576–572.
•  Эллегаард-Йенсен Л., Ааманд Дж., Крагелунд Б.Б.: Штаммы почвенного грибка Mortierella демонстрируют разный потенциал деградации фенилмочевинного гербицида диурона. Биодеградация. 2013; 24 : 765–774. PubMed Резюме | Полный текст издателя
• Эльтарики FEM, Тивари К., Алхут М.А.: Молекулярная характеристика и генетическое разнообразие четырех неописанных новых штаммов маслянистой Mortierella alpina из Ливии (программное обеспечение Mega X 16.04.4 (с рабочим столом Unity, режим АНАЛИЗ)). Зенодо. 2021. Полный текст издателя
• Гамс В.: Ключ к видам Mortierella. Персония. 1977; 9 : 381–391.
• Ha SJ, Park CS, Ryu YW: Выбор источника органического азота и оптимизация условий культивирования для производства арахидоновой кислоты из Mortierella alpina. Корейский J. Biotech. био. 2004; 19 : 78–82.
•  Hibbett DS, Binder M, Bischoff JF: Филогенетическая классификация грибов более высокого уровня. Микол. Рез. 2007 г.; 111 : 509–547. PubMed Резюме | Полный текст издателя
• Хоффманн К., Павловска Дж., Вальтер Г.: Структура семейства Mucorales: синоптический пересмотр, основанный на всесторонних мультигенных генеалогиях. Персония. 2013; 30 : 57–76. PubMed Резюме | Издатель Полный текст | Бесплатный полный текст
• Хуан С., Чен С.Ф., Сюн Л.: Производство одноклеточного масла из недорогих субстратов: возможность и потенциал его индустриализации. Биотех. Доп. 2013; 31 : 129–139. PubMed Резюме | Полный текст издателя
• Хван Б.Х., Ким Дж.В., Пак С.И., и др. : Высокоуровневое производство арахидоновой кислоты с помощью периодической культуры Mortierella alpina с подпиткой с использованием NH ₄ OH в качестве источника азота и контроля pH. Биотех. лат. 2005 г.; 27 : 731–735. PubMed Резюме | Полный текст издателя
• Хайд К.Д., Хонсанан С., Дживон Р.: Заметки о разнообразии грибов 367–490: таксономический и филогенетический вклад в таксоны грибов. Грибные водолазы. 2016; 80 : 1–270. 10.1007/s13225-016-0373-x
• Хан Дж., Мохаммед К., Каур Н., и др. : Синтез производных амида коричной кислоты и биологическая оценка ингибирующей активности -глюкозидазы. Междунар. Дж. Мед. Токс. Юридическая Мед. 2018; 21 (3-4): 216–220. Полный текст издателя
• Кимура М.А.: Простой метод оценки скорости эволюции замен оснований посредством сравнительных исследований нуклеотидных последовательностей. Дж. Мол. Эво. 1980; 16 : 111–120. PubMed Резюме | Полный текст издателя
•  Kirk PM: Mortierella elongata. IMI Описание Fungi Bact. 1997; 1303 : 1–2.
• Ли Х.И., Нгуен Т.Т., Мун Х.И.: Подтверждение наличия двух неописанных видов грибов из Токдо в Корее на основе современной системы классификации с использованием нескольких локусов. Микобиология. 2015; 43 : 392–401. PubMed Резюме | Издатель Полный текст | Бесплатный полный текст
•  Линнеманн Г.: Die Mucorineen-Gattung Mortierella Coemans. Пфланценфоршунг. 1941; 23 : 1–64.
• Майтиг АМА, Алхут МАМ, Тивари К.: Выделение и скрининг внеклеточного фермента протеазы из грибковых изолятов почвы. J. Pure Appl. микробио. 2018; 12 (4): 2059–2067. Издатель Полный текст
• Надь Н.Г., Петковиц Т., Ковач Г.М., и др. : Где скрыто невиданное грибковое разнообразие? Исследование Mortierella показывает большой вклад эталонных коллекций в идентификацию последовательностей грибков в окружающей среде. Новый Фитол. 2011; 191 : 789–794. PubMed Резюме | Полный текст издателя
• Нгуен ТТТ, Ли Х.Б.: Характеристика зигомицета, Mortierella minutissima из пресной воды реки Йонсан в Корее. Кор. Дж. Микол. 2016; 44 : 346–349.
• Осорио Н.В., Хабте М.: Десорбция фосфатов из почвы, вызванная грибком, растворяющим фосфаты. Комм. Почвовед. Анальный завод. 2014; 45 : 451–460. Полный текст издателя
• Rhie SG, Kang HY, Park YJ: Влияние грибов Mortierella alpina и экстрагированного масла (богатого арахидоновой кислотой) на рост и способность к обучению самок и детенышей крысы. J. Korean Soc. Пищевая наука. Нутри. 2002; 31 : 1084–1091. Полный текст издателя
• Rhie SG, Park YJ: Эффекты роста Mortierella alpina содержали диеты и заживляющие ожоги экстракта масла Mortierella alpina (богатого арахидоновой кислотой) у крыс. Сбор диссертаций. Универ. Сувон. 2001; 19 : 285–297.
• Shin HS, Oh IH, Lee JH: Выделение и производство арахидоновой и эйкозапентаеновой кислот грибами. Дж.Инд Тех. 1994; 2 : 43–52. PubMed Резюме | Полный текст издателя
• Шин Х.Т., Ли С.В., Парк К.М., и др. : Характеристики глубинной и твердофазной ферментации для производства арахидоновой кислоты с помощью Mortierella alpina. Корейский J. Biotech. био. 2005 г.; 20 : 60–65.
• Симидзу С., Сакурадани Э.: Производство масла отдельными клетками с помощью Mortierella alpina. Дж. Биотех. 2009 г.; 144 : 31–36.PubMed Резюме | Полный текст издателя
• Спатафора Дж. В., Чанг И., Бенни Г. Л.: Филогенетическая классификация зигомицетных грибов на уровне типа, основанная на данных в масштабе генома. Микология. 2016; 108 : 1028–1046. PubMed Резюме | Издатель Полный текст | Бесплатный полный текст
• Тамура К., Стечер Г., Петерсон Д., и др. : MEGA6: молекулярно-эволюционный генетический анализ версии 6. 0. Мол. биол. Эвол. 2013; 30 : 2725–9. PubMed Резюме | Издатель Полный текст | Бесплатный полный текст
•  Тамайо-Велес А, Осорио, Северо-Запад: Повышение плодородия почвы путем разложения подстилки и инокуляции грибком Mortierella sp.на плантациях авокадо в Колумбии. Комм. Почвовед. Анальный завод. 2018; 49 : 139–147.
•  Tiwari K, Razip NAFBM: Антагонистическая активность и молекулярная характеристика эндофитного агента биоконтроля Штаммы грибов Trichoderma harzianum , выделенные из лекарственных растений Terminalia catappa L. в Западной Малайзии. Междунар. Дж. Мед. Токс. Юридическая Мед. 2020; 23 (3-4): 48–53. Полный текст издателя
• Тивари К., Ганесен М.: Новые эндофитные штаммы Penicillium chrysogenum , выделенные из Plectranthus amboinicus L.Западной Малайзии. Рез. Дж. Микробио. 2020; 15 (1): 15–21.
• Тивари К., Алхут М.А., Эльтраики MEF, и др. : Оценка распространенности и генетического разнообразия микотоксигенных Colletotrichum gleosporioides в зернах пшеницы, собранных в разных регионах Ливии. Междунар. Дж. Мед. Токс. Юридическая Мед. 2019а; 22 (1-2): 184–185.
• Тивари К., Алхут М.А., Шарма А.К.: Паклитаксел грибкового происхождения: проблемы и обновления. Междунар.Дж. Мед. Токс. Юридическая Мед. 2019б; 22 (1-2): 160–161. Полный текст издателя
• Тивари К., Алхут М.А., Эльтраики MEF: Встречаемость и распространенность микотоксигенного Fusarium solani в образцах лука, собранных из разных регионов Ливии. Азиатский J. Biol. науч. 2018; 11 (4): 192–196. Полный текст издателя
• Ван Л., Чен В., Фэн Ю., и др. : Характеристика генома масличного гриба Mortierella alpina. PLoS Один. 2011; 6 : e28319. PubMed Резюме | Издатель Полный текст | Бесплатный полный текст
•  Вагнер Л., Стилов Б., Хоффманн К.